专题课题多聚酶链式反应扩增DNA片段分析报告.ppt

【互动探究】　(1)PCR中由碱基错配而引起哪种变异？ (2)假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所用DNA的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占多少？ 【提示】　(1)基因突变。　(2)50% 【易误警示】　(1)DNA母链的3′端对应着子链的5′端，即DNA的两条链是反向平行的。 (2)解旋酶的作用是使DNA两条链的氢键断开，而DNA聚合酶与DNA连接酶都是催化形成磷酸二酯键的。 (3)DNA聚合酶是将单个核苷酸加到已有的单链片段的3′端上，需要模板，而DNA连接酶连接的是两条DNA片段的缺口，不需要模板。 知能过关演练 本部分内容讲解结束 点此进入课件目录 按ESC键退出全屏播放 谢谢使用 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题5　DNA和蛋白质技术 基础自主梳理 核心要点突破 知能过关演练 山东水浒书业有限公司· 优化方案系列丛书 专题5　DNA和蛋白质技术 基础自主梳理 核心要点突破 知能过关演练 返回 课题2　 多聚酶链式反应扩增DNA片段 课标领航 1．尝试PCR(DNA多聚酶链式反应)技术的基本操作。 2．理解PCR的原理和反应过程。 3．讨论PCR的应用。 【重点】　PCR的原理和反应过程。 【难点】　PCR技术的操作过程。 情境导引 PCR诊断技术又叫多聚酶,链式反应技术，它采用分子技术,模拟核酸在体内的复制，从而判,定疾病病原体的种类，所以从本,质上来说，这是一种分子诊断方法。 核心要点突破 知能过关演练 课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段 基础自主梳理 基础自主梳理 一、PCR扩增的原理及条件 1．概念：PCR即_______________，是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。它能以极少量的_____为模板，在短时间内复制出上百万份的DNA拷贝。 2．原理 (1)DNA的热变性：在80～100 ℃的温度范围内，DNA_________结构解体，双链分开，这个过程称为_____。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。 多聚酶链式反应 DNA 双螺旋 变性 (2)子链的合成：①需要______；②合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 3．条件 (1)______模板。 (2)分别与模板DNA两条链相结合的两种引物。 (3)A、T、G、C四种______________。 (4)耐热的DNA聚合酶，一般用Taq DNA聚合酶。 (5)需要稳定的_____和能严格控制_____的温控设备. 引物 DNA 脱氧核苷酸 pH 温度 思考感悟? 1．什么是引物？若要克隆DNA，应加入几种特定的引物？ 【提示】　所谓引物是指两段与待扩增的DNA序列互补的一小段DNA或RNA片段。DNA是由两条反向平行排列的脱氧核苷酸长链构成的。在DNA扩增时，DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3′端延伸DNA链，因此克隆DNA时应加入两种引物。 二、PCR反应过程 PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可以分为____、复性和延伸三步。 1．变性：当温度上升到______以上时，双链DNA解聚为单链。 2．复性：温度下降到_______左右，两种引物通过________________与两条单链DNA结合。 3．延伸：温度上升到_____左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在_______________的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 变性 90 ℃ 50 ℃ 碱基互补配对 72 ℃ DNA聚合酶 思考感悟? 2．PCR循环过程中，变性温度设置95 ℃，时间设置30 s的原因是什么？ 【提示】　变性温度过低，解链不完全导致DNA不能扩增。变性温度过高影响酶的活性；在此温度条件下如果处理时间过长，将会导致酶的钝化。 三、实验操作 1．实验用具 (1)PCR仪：该仪器能自动调控_____，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个___________代替，操作时按程序在3个水浴锅中来回转移PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管：总容积为0.5 mL，实际上是进行离心的场所。 (3)微量移液器：用于吸取转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头每吸取一种试剂后都要更换。 温度 恒温水浴锅 2．操作步骤 准备→____→混合→_____→反应。 四、操作提示 1．为避免外源DNA等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行__________。 2．所用的_________和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存。 五、DNA含量的测定 1．原理：利用DNA在260 nm的紫外线波段的______曲线来测定相应含量。 2．计算公式：DNA含量(μg)＝50×(260 nm的读数)×_____________