仪器第4章紫外-可见分子吸收光谱法资料.ppt

Apparatus Schematic diagram of CL sensor based on nanoparticles Chinese Patent No.1,2001 Gas in Ceramic substrate nanoparticles Heater controller Electric wires Gas out Quartz tube 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 相对误差 T 只有当 则 测量误差最小，此时 - logT = log e = 0.434 = A 即吸光度为0.434时，浓度测量才具有最小相对误差。 四、紫外-可见分子吸收光谱的发展 1、光声光谱 激光光源 吸收池 光声传感器 记录装置 不仅可用于液体样品、也可用于固体样品 二、长光程紫外-可见分光光度计 激光光源 吸收池 记录装置 双 叉 光 纤 光导纤维传感器 第五节 荧光、磷光和化学发光分析法 （Fluorescence，phosphorescence and chemiluminescence analysis） 一、理论基础 1、分子发射光谱与分子能级结构 吸光 无辐射跃迁 系间跨越 单重线态 三重线态 荧光 磷光 E0 E1 E2 振动弛豫 （1）分子吸收光谱与分子荧光光谱 吸光 荧光 250 300 350 400 450 蒽乙醇溶液吸收和荧光光谱 相对强度 300 400 500 相对强度 荧光光谱与吸收光谱镜像对称 荧光光谱较吸收光谱简单 硫酸奎宁在稀硫酸中的荧光光谱与吸收光谱 （2）荧光量子产率（荧光效率） 发荧光的两个必要条件 分子能吸收光子而跃迁至激发态 激发态分子能以光的形式释放能量 荧光效率（?f）= 发出光子数 吸收光子数 如果一个分子将吸收的光子全部释放，则其量子产率为100%。 化合物 荧光效率 溶剂 荧光素 0.92 （0.1MNaOH） 曙红 0.19 （ 0.1MNaOH） 罗丹明B 0.97 （乙醇） 蒽 0.31 （己烷） 核黄素 0.26 （水，pH7） 菲 0.10 （乙醇） 萘 0.12 （乙醇） 酚 0.22 （水） 叶绿素 0.32 （苯） 某些化合物的荧光效率 （3）量子产率与分子结构 荧光通常发生在具有刚性结构和平面结构的?-电子共轭体系分子中，任何有利于提高?-电子共轭度的结构改变，都将提高荧光量子产率，或使荧光波长向长波长方向移动。 化合物 荧光效率 平均波长 苯 0.07 283 联苯 0.18 316 对联三苯 0.93 342 化合物 荧光效率 平均波长 苯 0.07 283 萘 0.23 334 蒽 0.36 402 苯 0.07 283 甲苯 0.17 285 乙苯 0.18 286 2、 荧光定量分析基础 If = ?fIa= ?f ( Io-I ) If : 荧光强度 Io : 所吸收的辐射强度； ?f ：荧光效率 （1）荧光强度与浓度 将指数展开： 如果吸光度A 0.05, 方括号中其他各项与第一项相比均可忽略： K = ?f I0 ? b 由于A=?bc：故在实验条件固定时， 荧光强度与浓度成正比,即： （2）荧光熄灭 If C 0 内滤效应 发射的荧光在溶液中通过时被基态分子所吸收而使荧光强度下降的现象。 淬灭效应 碰撞淬灭： 荧光分子之间或荧光分子与熄灭剂分子之间碰撞引起的荧光熄灭效应 M + h? ? M* (吸光） M* ? M + h? ’ （发生荧光） M* + Q ? 熄灭 例如：芳香烃的荧光可以被溶解 O2 所淬灭 转入三线态的淬灭 含溴化物、碘化物、硝基化合物、重氮化合物、羰基化合物及某些杂环化合物容易转变为三重态，因而易使荧光淬灭 二、 荧光分析的仪器 光源 单色器 液槽 检测器 记录器 单色器 I0 If 1、光源 汞 弧灯 山 弧灯 激光光源 气 荧光光源强度 紫外-可见吸收光谱光源强度 激光诱导荧光 Laser Induced fluorescence 低压汞灯：254 nm 2、单色器 滤光片 棱镜 光栅 400 500 600 nm Relative FL Intensity EX EM Wavelength /? Stocks 位移 标准1 样品2 Wavelength /? If 荧光光谱 If1 ?1A1 If2 ?2A2 = 量子产率的测定 ?1 A1 If1 ?2 A2 If2 = 奎宁在0.1M的硫酸中荧光量子产率的绝对值为0.55。 荧光分