荧光光谱法121220资料.ppt

2008年诺贝尔化学奖 green-fluorescent protein (GFP) 电子能级的多重性 M=2S+1 激发态→基态的能量传递途径 激发光谱与发射光谱的关系 二、荧光的产生与分子结构的关系 relation between fluorescence and molecular structure 2.有机化合物的分子结构与荧光的关系 三、影响荧光强度的因素 relation between fluorescence and molecular structure 4.内滤光作用和自吸现象 5.荧光熄灭剂 仪器光路图 仪器框图 荧光分光光度计 F95-96荧光分光光度计 F02-3M荧光分光光度计 F-4500荧光分光光度计 1.光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm) 氙灯：紫外、可见光区均可用作光源 扫描激发光谱图和发射光谱图 8一羟基喹啉—A1荧光光谱图 （注：ex-365nm（紫外）,em-512300-800） 测标样绘制标准曲线 仪器实验条件的选择 荧光分析法在环境监测中的应用 1. 有机污染物的测定： 表1.直接法测定环境中的有机污染物 表2.间接荧光法测定环境有机污染物 表2.续 水中石油的测定 —分子荧光方法:检出限为0.001mg/L，正己烷 萃取,无污染等 —红外测 油法：检出限为几到几十mg/L，四 氯化碳萃取污染严重等 环境中无机污染物的测定 水质监测：天然水、饮用水、污水中的铝、硼、钴、铜、铁、锰、钼、镍、铅、锡、铀(2)、钒、锌；氰化物、硝酸盐态氮、亚硝酸盐态氮、硫化物、 等。饮用水中的砷、硼、铍、铬(2)、铁、硒、硅、氟化物。 土壤、水系沉积物?及固态污染物监测： 硼、锌；石油烃、苯并芘等。  利用蛋白质的天然荧光检测蛋白质的结构变化 氨基酰化酶在十二烷基硫酸锂作用下内源荧光发射谱随作用时间的变化,随作用时间的增加，荧光强度逐渐减小。表明随作用时间的增加，该蛋白质逐渐变性，发生去折叠，蛋白质内部的荧光生色团逐渐暴露在极性水环境中。 Normalized fluorescence emission spectra of DNA-bound cyanine dimers, identified by the color key on the sidebar. Analysis of DNA Structure, DNA Binding and DNA Damage Single Nucleic Acid Molecule Detection Nucleic Acid Conformational Analysis DNA Binding Assays ? Assessing DNA Damage Assays for Enzymes that Modify Nucleic Acids 光镊(optical tweezers) 光镊是以光的力学效应为基础发展起来的一种新型技术 用光镊可以实现对细胞、细胞器以至生物大分子进行非机械接触的、无损的捕获和操作。 光镊在生物学研究中的应用，大都与荧光技术密切结合。所研究的细胞或生物大分子往往采用荧光探针进行标记。例如，用荧光探针标记肌动蛋白，结合光镊技术，拍摄了单个“分子马达”的运动情况。 光致发光材料荧光光谱分析 荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂(quenching medium)。如卤素离子、重金属离子、氧分子以及硝基化合物、重氮化合物、羰基和羧基化合物均为常见的荧光熄灭剂。 6、散射光 小部分光子和物质分子相碰撞，使光子的运动方向发生改变而向不同角度散射。 瑞利光：光子和物质发生弹性碰撞，不发生能量交换，只是光子运动方向发生改变。其波长与入射光波长相同。 拉曼光：光子和物质发生弹性碰撞，发生能量交换，光子把部分能量转移给物质分子或从物质分子获得部分能量。从而发射出比入射光稍长或稍短的光。 散射光对荧光测定有干扰，尤其是波长比入射光波长更长的拉曼光，与荧光波长接近，对测定的干扰大，必须采取措施消除。拉曼光的干扰主要来自溶剂，当溶剂的拉曼光与被测物质的荧光光谱相重叠时，应更换溶剂或改变激发光波长 选择适当的激发波长可消除拉曼光的干扰 a:320nm或350n