五种菊花近缘植物组织培养研究.doc

五种菊花近缘植物组织培养研究 摘要： 以紫花野菊变种、纪伊潮菊、龙脑菊、那贺川野菊和矶菊５ 个菊花近缘种属植物无菌苗为试材， 进行了茎段离体快繁体系和离体叶片不定芽再生体系研究。结果表明： 最佳茎段增殖培养基分别为：紫花野菊变种， MS ＋ １.０ mg · L － １ ６ BA ＋ （０.０５ ～ ０.１０） mg · L － １ IBA ； 纪伊潮菊， MS ＋ ２.０ mg · L － １ KT ＋ ０.１ mg · L － １ NAA ； 龙脑菊， MS ＋ ０.５ mg · L － １ KT ＋ ０.１ mg · L － １ NAA ； 那贺川野菊， MS ＋ １.０ mg · L － １ KT ＋ ０.１ mg · L － １ NAA ； 矶菊， MS ＋ ２.０ mg · L － １ ６ BA ＋ ０.１ mg · L － １ NAA 。紫花野菊变种、纪伊潮菊、龙脑菊、那贺川野菊试管苗适宜生根培养基是１／２MS ； 矶菊试 管苗适宜生根培养基为１／２MS ＋ ０.２ mg · L － １ NAA 。５ 个材料试管苗离体叶片愈伤组织诱导率均较高，但不定芽的诱导 率则因基因型而异，仅那贺川野菊和矶菊能诱导出不定芽。那贺川野菊在MS ＋ ０.５ mg · L － １ KT ＋ ０.１ mg · L － １ NAA 培养基上不定芽的再生率和增殖系数均最高，分别为７５.０％ 和３.４ ； 而矶菊在MS ＋ １.０ mg · L － １ ６ BA ＋ ０.５ mg · L － １ NAA 培养基上的不定芽再生率和增殖系数最高，分别达８０.０％ 和５.８ 。 关键词： 菊花近缘植物； 茎段； 叶片；组织培养 菊花近缘种属野生资源具有抗虫、抗病、抗逆等优良性状， 对栽培菊花的品种改良、抗性育种等种质创新十分重要， 同时也是进行菊属亲缘关系探讨和栽培菊花起源研究的重要材料。但来自不同生态类型的菊花近缘野生材料在越夏或越冬时难以存活， 造成种质资源严重丢失。植物组织培养技术已广泛应用于种质资源保存和离体快繁。自Hill （１９６８） 利用芽尖外植体通过愈伤组织诱导成株建立菊花再生体系以来， 许多学者以叶片［１ － ３ ］ 、茎段［４ － ５ ］ 、管状花［６ － ７ ］ 、花梗［８ ］ 等为外植体相继建立了菊花的离体再生体系， 原生质体培养［８ ］和体细胞胚培养再生体系［８ ］ 也获得了成功， 但有关菊花近缘野生物种组织培养研究鲜见报道。本试验以引自日本的具有抗虫性、耐盐性、耐水湿等优良性状的５ 种野生材料紫花野菊变种（Dendranthem a z aw adskii var.latilobum） 、纪伊潮菊（A j ania shiwogiku var.kinokuniense） 、龙脑菊（D.j aponicum） 、那贺川野菊（D.yoshinaganthum） 、矶菊（A.p acificum） 为试料， 探讨了不同生长调节剂组合和培养基种类对试管苗增殖、离体叶片愈伤组织诱导、不定芽再生以及试管苗生根的影响， 初步建立了５ 种供试菊花近缘野生植物的离体快繁体系和不定芽再生体系， 为该类具优良抗性性状野生资源的保存和利用奠定了基础。 1 　材料与方法 1.1 　材料 　　５ 种供试菊花近缘野生材料（表１） 均从日本收集， 保存于南京农业大学“中国菊花种质资源保存中心” 。 表1 　5 种菊花近缘野生材料 代号Code 中文名 染色体数目 花色 RG７ 紫花野菊变种 ２ n ＝ ２ x ＝ １８ 白色～ 粉色 ZB１ 纪伊潮菊 ２ n ＝ ８ x ＝ ７２ 黄色 ZB６ 龙脑菊 ２ n ＝ ２ x ＝ １８ 白色 ZB７ 那贺川野菊 ２ n ＝ ４ x ＝ ３６ 白色～ 粉色 ZB８ 矶菊 ２ n ＝ １０ x ＝ ９０ 黄色 1.2 　5 种菊花近缘野生植物离体快繁体系的建立 1.2.1 　不同植物生长调节剂组合对增殖的影响　 选取生长健壮的无菌苗， 切割成带１ 个节的节段，接种到增殖培养基中诱导不定芽， 共设９ 个处理（表２） 。每处理接种１０ 个外植体， ３ 次重复。培养２０ d 后统计增殖系数。增殖系数＝ （增殖后芽总数－ 接种芽数） ／接种芽数（注： 接种后死亡芽数不计入） 。 不同基本培养基对生根的影响　 将增殖培养诱导的健壮不定芽切割成带３ 个叶片、长１.５ ～２.５ cm 的茎段， 分别接种至MS 、１／２ MS 培养基中进行生根诱导。每处理６ 瓶， 每瓶接种４ 个外植体。 ２０ d 后统计生根苗数及平均根数， 测量根长， 计算生根率。 1.2.3 　不同生长素种类及浓度对生根的影响　 外植体的切取方法同１.２.２ ， 分别接种于添加０.０５ 、 ０.１ 、０.２ mg · L － １ 的NAA （