龟甲胶鹿角胶添加牛皮源驴皮源成分检测方法解读(给学员)资料.ppt

各位同仁，大家好，下面由我给大家介绍一下胶类药材检测新方法的培训。 * 我的讲课内容包括标准解读，样品制备，质谱条件优化，结果判断实例 * 首先进行一下标准的解读。在2012年，阿胶的补充检验方法得到国家食药监局的批复，在今年的8月份，龟甲胶、鹿角胶的补充检验方法也得到了批复。目前，各省级药检部门正在按照刚批复的2个方法进行龟甲胶、鹿角胶中牛皮源、驴皮源成分的检测工作。 * 在此同时，龟甲胶、鹿角胶、阿胶的鉴别方法拟收载于《中国药典》（2015版），目前正处于公示阶段。 * 胶类药材的鉴别项与补充检验方法的侧重点不同。鉴别项方法主要是针对正品的特征性进行鉴别。阿胶中检测的是阿胶特征离子。鹿角胶、龟甲胶分别检测的是鹿角、龟甲特征离子。而补充检验方法主要是针对掺伪情况进行检查。补充检验方法中，阿胶主要检测是可能掺伪的牛皮特征离子，鹿角胶、龟甲胶均是对可能掺伪的驴皮、牛皮进行检测。 * 下面我以鹿角胶的补充检测方法为例，进行解说。该方法包含两个检测项目：牛皮源成分和驴皮源成分。 * 已驴皮源成分检测部分为例。该方法的色谱、质谱条件如下。 * 根据检测模式为MRM的要求，应当选择串联四级杆质谱进行检测。色谱柱要求内径为2.1mm的柱子。这主要是因为在ESI源下，使溶液电离的最佳流速是0.2-0.3ml/min。而在线速度为0.2ml/min时，内径为2.1mm的色谱柱，才能达到最高理论塔板数。对于柱子长度，标准中没有规定，市场上长度为50cm，100cm,150cm的柱子均可采用。在胶类的鉴别项和补充检验方法标准中，共计有8个离子对。在实际检测工作中，可以在仪器方法中把8个离子对全部设定好。在标准中，流动相的洗脱时间为55min。特征离子的保留时间很短，为什么要设这麽长的时间。实际上，我们该用全扫描的方式，你就会发现。样品中的肽段很多，需要较长的时间，把柱子里的成分洗脱出来。 * 在系统适应性试验中，标准规定，参比溶液MRM色谱峰的信噪比均应大于3:1.在其他的补充检验方法中，对于质谱条件，往往是根据起草单位使用的仪器，进行参数规定，实际在标准执行中，可能用到不同厂家、不同型号的质谱仪器，标准中的参数规定就没有意义了。因此，我们在标准中指规定了参比溶液的信噪比3:1.只要你所使用的仪器经过参数优化后，达到标准规定的信噪比，就可以进行此项检验工作。实际上，目前市场上的QQQ均可达到标准中的规定。 * 标准中的参比溶液准备与样品溶液制备相比，主要是增加了一步稀释。就是取对照药材溶液5ml，用基质溶液稀释至100ml，形成参比溶液。对于鹿角胶中检驴皮的补充检验方法，参比溶液相当于正品鹿角胶中掺加了5%的驴皮的溶液。结果规定，供试品色谱峰不得大于参比溶液中相应的峰面积值，就是要求正品中掺入的杂质不得过5%。 以上是对标准的解析部分。下面介绍培训的第二部分内容：溶液制备。这里列出了溶液制备需要的实验材料。依照使用先后，包括注射器，微孔滤膜，2ml离心管，200ul可调微量进样器及枪头。25ul进样内衬管和进样瓶。 溶液制备中主要流程包括超声溶解，如果是参比溶液的制备，需要用基质溶液把对照药材溶液稀释20倍，形成参比溶液。然后取100ul滤液，加新配值的胰蛋白酶溶液10ul，37℃酶解12小时后，采用液质联用仪进行分析。 * 溶液制备的过程中，关键是酶解。胰蛋白酶要保证在碱性条件下反应。市场上买的酶如果是溶液状态，需要注意其溶液的PH值。标准中规定用1%碳酸氢铵溶解，是为了保证酶在约PH8的条件下放映。当PH值pH9.0不可逆失活。目前，常用到的酶包括Promega V5113，V5280Sigma，货号为：T1426-50MG中检院，（使用时需加倍） 这些酶的信息大家可以在网站上查到。这张图列出了PROMEGA V5113的信息。 这张图列出了V5228 这是SIGMA的一些酶的信息。 以上是对溶液制备的介绍，下面介绍培训的第三部分内容：质谱条件的优化。 在标准中，参比溶液是经过稀释20倍的，因此牛皮特征离子的浓度比较低，不太适合用于质谱条件优化。 * 质朴条件优化时，可以取黄明胶对照药材母液，直接加酶进行反应。得到含高浓度牛皮特征离子的溶液。来进行质谱条件优化。 * 以上是对溶液制备的介绍，下面介绍培训的第三部分内容：质谱条件的优化。 * 胶类药材检测新方法培训 程显隆 联系电话：010QQ微信：wxid_lncxl E-mail：lncxl@; cxl@ 培训内容 标准解读 样品制备 质谱条件优化 结果判断示例 一、标准解析胶类补充检验方法批准件 一、标准解析胶类药材鉴别项（中国药典2015版公示品种） 龟甲胶 鹿角胶 阿胶 鉴别项与补充检验方法的目的 鉴别项 阿 胶?