高二生物《基因工程的基本操作程序》课件摘要.ppt

小结： 基因工程的基本操作程序 * 专题1 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序 四个步骤 一、获取 二、构建 三、导入 四、鉴定 一、获取——目的基因 （一）人工合成 （二）自然物种分离 1、PCR 2、基因文库 1、PCR技术 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction） （1）原理：DNA双链复制的原理 （2）过程 高温变性（90~95℃） 低温退火（55~60℃） 中温延伸（70~75℃） 多次重复 （3）条件 酶 模板 引物（对） 原料 热稳定DNA聚合酶 如何利用PCR技术获取目的基因？ 引物（对） 一段已知目的基因核苷酸序列 下图表示利用PCR技术扩增 目的基因的部分过程，其原 理与细胞内DNA复制类似。 下列叙述错误的是 A．从理论上推测，第二轮循环产物中含有引物A的DNA片段占3/4 B．在第二轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段 C．引物之间或引物自身发生碱基互补配对则不能扩增目的基因 D．耐热的DNA聚合酶总将游离的脱氧核苷酸连接到3’端 B 2、基因文库 （1）基因组文库 （2）部分基因文库 cDNA文库 基因组文库和部分基因文库 二、构建——基因表达载体 (1)将图中①的DNA用HindⅢ、BamH Ⅰ完全酶切后，反应管中有 种DNA片段。 (2)图中②表示HindⅢ与BamH Ⅰ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得 种重组质粒； 如果换用Bst Ⅰ与BamH Ⅰ酶切，目的基因与质粒连接后可获得 种重组质粒。 4 2 1 三、导入——受体细胞 转化 用Ca2+处理细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 感受态细胞 （一）将目的基因导入微生物细胞 原核生物特点： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质少 转化方法： 1、农杆菌转化法 （二）将目的基因导入植物细胞 2、基因枪法 3、花粉管通道法 （三）将目的基因导入动物细胞 方法：显微注射技术 含目的基因的表达载体 动物的 受精卵 早期 胚胎 雌性动物输卵管或子宫 转基因 动物 含目的基因的受精卵 显微注射 分裂分化 移植 发育 四、鉴定——目的基因的稳定与表达 检测 （分子水平） 鉴定（个体水平）： ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 DNA-RNA分子杂交 抗原-抗体分子杂交 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 从基因文库中获取、 利用PCR技术扩增、 人工合成 目的基因、启动子、终止子、标记基因 农杆菌转化法、显微注射技术 是否插入、转录、翻译 方法： 分子杂交技术 分子检测： 个体鉴定 *