微生物检验的关键环节把控摘要.ppt

* 抗酸染色步骤 2、染色包括初染、脱色、复染三步。 冲洗 干燥 油镜观察 石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’ 美蓝复染1 ’ 冲洗 冲洗 初染 脱色 复染 * 抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。 抗酸染色注意事项 ① 无菌操作 ② 涂片厚度要适中 ③ 染色时间要充分 ④ 脱色是关键步骤，要彻底 ⑤ 初染加热勿沸腾勿干涸。 形态： 细长，略弯曲的杆菌，常堆积成团，排列无序，偶可见呈分枝状生长，无鞭毛和芽胞。 染色性： 不易着色，抗酸染色阳性。菌体呈红色，背景及非抗酸性细菌呈兰色。 结核分枝杆菌 结核分枝杆菌 结核分枝杆菌 * 涂片结果报告标准 阴性 300 视野 0条 报告菌数 300 视野 1～8条 阳性1＋ 100视野 3～9条 阳性2＋ 10视野 1～9条 阳性3＋ 每视野 1～9条 阳性4＋ 每视野 10条 抗酸染色涂片结果报告 抗酸染色报告应显示找到或未找到或可疑抗酸杆菌三种结果，报告中应以加号体现标本中抗酸杆菌的存在量。如找到抗酸杆菌++；见到染色不典型抗酸杆菌+，建议再送标本。 不能报告找到结核杆菌但可报告未找到结核杆菌 * 结核菌检测方法 抗酸染色 结核杆菌培养 结核菌素试验 结核杆菌血清学检查 结核杆菌的抗原、抗体检查 结核杆菌基因检测（PCR） * * 墨汁负染色 目的 墨汁负染色法观察新型隐球菌的形态。 原理 新型隐球菌的荚膜较厚，一般不易着色，同时菌体折光性较强，用墨汁负染色法可在黑色背景下看到透亮菌体。 墨汁染色染色步骤 取脑脊液第一管标本3000r离心15分钟，移去上清液，试管内留下0.5ml左右，混匀。 分别取2滴混匀了的脑脊液和1滴墨汁放入清洁小试管底部，混匀。 取一张清洁载玻片，把2滴脑脊液和1滴墨汁的混合物混匀放在载玻片，把盖玻片覆盖于菌液上，避免产生气泡。 放置2分钟左右后镜检。 墨汁负染色法镜检 隐球菌可于黑色背景下见一圆形或卵圆形透亮菌体，外有一层透明的宽厚荚膜，荚膜较菌体大1-3倍，折光性强。 急球菌大小不一，有的孢子生芽，芽颈甚细。微调观察有双圈。 在低倍镜下，把光线调暗，并调整微调，能清楚看到菌体有双层反射光圈。 菌体次中央或偏侧有一空泡。 新型隐球菌形态 酵母菌，芽生繁殖 在脑脊液、痰液组织中呈圆形或板圆形， 直径约5—20μm， 四周包括肥厚的胶质样夹膜。 * 墨汁负染色法结果的观察 * 墨汁染色注意事项 注意先将盖玻片一边接触菌液缓缓斜放下，以免产生气泡。 在用低倍镜有哪些信誉好的足球投注网站时一定要适当调整显微镜的可变光栏，不要把显微镜可变光栏完全打开，光线太亮会看不见隐球菌的折光圈，造成假阴性。 当墨汁过多地可遮盖隐球菌，产生假阴性。 当不能区分时，加KOH液后菌体不破坏为隐球菌属，消失为污染菌。 重点看周边。 墨汁染色报告 墨汁染色报告应显示阳性和阴性结果。 不能报告找到新型隐球菌但可报告未找到新型隐球菌 新型隐球菌检测方法 墨汁染色（菌体） 真菌培养（活菌） ELISA（荚膜多糖抗原） 乳胶凝集试验（夹膜多糖抗原） 胶体金法（夹膜多糖抗原） 新型隐球菌基因检测（PCR） * * Thank you! 5、静脉导管尖端标本 静脉导管尖端 ： 培养静脉导管尖端是为了明确细菌来源。最常用的方法是半定量的方法，方法是用5cm长的导管末端部分在血液琼脂平板上滚动4次。培养物出现15个以上的菌落，提示有潜在的导管相关性感染。 6、脑脊液标本 ⑴ 培养基：5%羊血琼脂、5%兔血巧克力琼脂、葡萄糖肉汤 ⑵ 培养环境：置5 % CO2、35℃环境培养。 7、胆汁或胸水或腹水标本 ⑴ 培养基：如标本量大时可按血液培养方法直接取16-20ml分别种入需氧和厌氧培养瓶。如标本 量有限，可接种5%羊血琼脂、中国兰、葡萄糖肉汤。 ⑵ 培养环境：35℃空气环境培养。 8、脓液标本 ⑴ 培养基：5%羊血琼脂、中国兰。 ⑵ 培养环境：35℃，空气环境培养。 9、生殖道标本 普通细菌培养标本接种： ⑴ 培养基：5%羊血琼脂和5%兔血巧克力琼脂。 ⑵ 培养环境：置5%CO2、35℃环境培养。 淋球菌标本的接种： ⑴ 培养基：接种于专用MTM平皿上。 ⑵ 培养环境：置5%CO2、35℃环境培养。 * * 三、细菌涂片、染色与镜检操作规范 1、标本涂片 接种平板后用刚接种平板的拭子涂抹玻片，如为痰，重新挑取脓性或无血部位痰或气管吸出物涂抹玻片，涂片应薄且均匀（透过涂片部位可看清楚下面印刷品的字迹）。 2、固定 使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固