高二生物微生物的实验室培养上要点.ppt

本节学习目标 1 了解微生物 2 培养基的种类和成分 3 无菌技术——消毒和灭菌的区别和方法 4 牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程 5 分离细菌方法：纯化大肠杆菌 2. 无菌技术 (1)消毒和灭菌的区别 培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是(　　) ①化学消毒　②灼烧灭菌　③干热灭菌　④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌　⑥巴氏消毒法　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤ 1为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留在接种环上的菌种，划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 ．2在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3在做第二次划线以及其后划线操作时为什么部是从上一次划线 的末端开始划 线？ 使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使菌种的数目逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 (二)大肠杆菌分离与纯培养(以及菌种的保藏) (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。 (2)纯化大肠杆菌 ①原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 ②方法：平板划线法、稀释涂布平板法。 平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面；稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 (3)菌种的保藏 ①短期保存：固体斜面培养基上4℃保存，菌种易被污染或产生变异。 ②长期保存：－20℃甘油管在冷冻箱中保藏。 特别提醒：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的温度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发；又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 课后总结 1 了解微生物 2 培养基的种类和成分 3 无菌技术——消毒和灭菌的区别和方法 4 牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程 5 分离细菌方法：纯化大肠杆菌 倒平板技术 1 2 3 4 倒平板技术 1 2 3 4 4.等待平板冷却凝固，大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 ．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. ．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 四、分离细菌方法 2、稀释涂布平板分离法 1、平 板划线分离法 ★ 1、平 板划线分离法 2、涂布分离法 2、涂布分离法 稀释涂布 涂布平板分离法是样品经过适当稀释后，用无菌玻璃涂棒取稀释液均匀地涂布在培养皿的琼脂平板表面，培养后挑取单菌落。 2、培养：在LB液体培养基上扩大培养 五、大肠杆菌的培养和分离 1、大肠杆菌 (1)特性