霍乱弧菌实验室检测要点.ppt

霍乱实验室检测 检验科 霍乱病原菌发现 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 1905年埃及埃儿托检疫站首次分离到ElTor弧菌，与霍乱弧菌甚为相似，但经过多年的观察并不致病或仅引起轻度腹泻，直到1937-1958年发生4次爆发后才逐渐认识到ElTor弧菌致病性 1992年10月印度马德拉斯发现了新菌型O139霍乱弧菌 一、霍乱概述 霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌（V．cholerae）引起的急性肠道传染病，发病急、传播速度快、波及范围广、危害严重的甲类传染病。 是国内交通检疫传染病之一。 也是当今三种国际检疫传染病中最严重的一种。 二、霍乱病原学 霍乱的病原学分类 霍乱的病原学特征 霍乱弧菌抗原结构及分类 抗原结构 霍乱弧菌有耐热的菌体（O）抗原和不耐热的鞭毛（H）抗原。H抗原为霍乱弧菌属所共有；O抗原有群特异性和型特异性两种抗原，是霍乱弧菌分群和分型的基础。 WHO腹泻控制中心将霍乱弧菌分为三群。 一、01群霍乱弧菌：包括古典生物型霍乱弧菌（vibrio cholerde）和埃尔托生物型（vibrio cholerde EL-Tor biotype）。01群的特异抗原有A、B、C三种，其中A抗原为01群所共有， A抗原与其他B与C抗原结合则可分为三型，即：原型——AC（稻叶，Inaba）、异型——AB（小川，Ogawa）和中间型——ABC（彦岛，Hikojima）。 二、非01群霍乱弧菌：本群弧菌鞭毛抗原与01群相同，而菌体（0）抗原则不同，不被01群霍乱弧菌多价血清所凝集，依O抗原之异，本群可分为137个血清型。以往认为本群仅引起散发的胃肠炎性腹泻，一般此类弧菌感染不作霍乱处理，但1992年在印度及孟加拉等地发生霍乱暴发流行，后证实流行菌不被01群和137个非01群霍乱弧菌诊断血清所凝集。乃定为0139霍乱弧菌，并认定为真正的霍乱弧菌。 三、不典型01群霍乱弧菌：可被多价01群血清所凝集，但该群菌不产生肠毒素，因此无致病性 霍乱病原学特点 形态与染色 弧状或逗点状 革兰染色阴性 有一根单鞭毛，细菌运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流星状 革兰染色 电镜负染色—鞭毛 霍乱弧菌动力视频链接/v_show/id_XNTg3MTczNTY4.html 三、霍乱弧菌常规检验 样本采集、送检和保存 标本的检验流程 样本采集、送检和保存 粪便：标本的采集以病人粪便为主，水样便采取1～3mL，亦可用棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm处采取。急性期病人取水样便标本在增菌培养的同时可取其粘液絮片或用棉拭子直接接种于碱性琼脂、TCBS琼脂培养基。不能立即检查的粪便标本，要放入碱性蛋白胨水中。 检验流程 接收到大便动力弧菌培养标本，请先建单。方法如下 1. 左键单击微生物检验，进入微生物检验窗口。 2.单击标本号（左键、右键均可），会出现下拉框。单击“其它” 3.该标本会由lis自动生成编号，如1505970005。 4.编号由lis自动生成后，根据病人实际信息，先选择“患者类别”，然后输入患者编号（门诊号或住院号），项目类别自动显示为大便力霍乱弧培养。最后一步，点“建单”。 建单完成后，如下图 5.取粪便标本在高倍镜暗视野下看动力，看完动力后，在“初步动力”栏录入结果（阴性或阳性），并审核打印报告。同时粪便标本转种到碱性胨水中并放入35℃孵箱中培养,在化验单上记录转种时间。 6.增菌培养6-8小时后，需要取胨水生长物再次观察动力，进行6-8小时动力报告。并转种到庆大霉素平板并放入35℃孵箱中培养。在进行6-8小时动力报告时，需要先取消之前的审核，在原报告单上进行审核（1505970005）。 疑似菌落初步鉴定： 7.庆大平板培养18-24h后挑取可疑菌落进行动力观察，如动力阴性，可进行最终阴性报告，如下图。 注意： 1.动力试验阴性，无需进行血清制动试验。 2.任何一次动力阳性，都需进行血清制动试验并在LIS上记录和审核试验结果。 3.当动力和血清制动试验同为阳性时，为疑似霍乱弧菌感染，要立即通知开单科室和医务处，对病人采取相应的隔离治疗等必要措施。 血清制动试验包括4瓶血清。第1瓶为O1群多价，第2、3瓶为小川、稻叶型单价。第4瓶为O139群抗血清。当观察到动力阳性，首先进行O1群多价的制动试验。如为阴性，接着做O139群的制动试验。两者均阴性，可初步排除霍乱弧菌病感染。如O1多价制动试验阳性，则进一步进行第2、3瓶的制动试验，即进行小川、稻叶型单价血清的制动试验 注意：门诊在上午11：00之前收到的大便弧培标本，需要将转种好的胨水和患者化验单一起转运至微生物室，后续步骤由微生物室来完成：门