实验诊断实验课课件要点.ppt

实验一白细胞计数 一目的：熟悉白细胞计数方法，掌握白细胞计数参考值及临床意义。 二原理：用2%稀醋酸(冰乙酸)作白细胞计数稀释液，可使红细胞溶解，留下白细胞，用血细胞计数板计数一定体积中的白细胞数，计算出每升血液中白细胞的总数。 三器材：白细胞稀释液、显微镜、计数板、采血针、小玻棒、小试管、试管架、微量吸管、小纱布、75％酒精棉球、消毒干棉球 四步骤：1.以2％冰乙酸溶液为白细胞计数稀释液，用吸管准确吸取稀释液 0.38ml，置于清洁干燥的小试管中。 2.毛细血管采血法:用微量吸管采血至20微升处，擦去管尖外围多余的血液，将管内血液迅速注入试管底部，并用上清液将管内残存血液洗净，立即混匀。待液体呈褐色后，再振荡均匀，用小玻棒取此液注入计数池内，静置2－3分钟。 3.用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数(N)。 压线细胞计数原则：数上不数下，数左不数右。 五 计算： 四个大方格内白细胞数（N）(N)/4×10×20×106＝白细胞数/升　　　 式中：四个大方格内白细胞总数/4，算出 每个大方格（即0.1微升）内白细胞平均数。 　　　 ×10 把0.1微升换算为1微升。 　　　 ×20 为血液稀释倍数。 　　　 ×106 将1微升换算为1L。　　　 六 参考值 ： 成人 （4～10）×109/L 　　　 6个月至2岁婴儿（11～12）×109/L 　　　 新生儿 （15～20）×109/L 八注意事项： 1．稀释倍数一定要准确（包括采血量和加稀释液量）。 2．小试管、计数板一定要清洁，以免杂质、微粒等被误认为细胞。 3.一定要待稀释液转化为棕褐色后方可进行计数，此时红细胞已完全破坏，否则可因红细胞残留而干扰计数，使结果偏高。 九思考题： 白细胞总数增多的临床意义？ 实验二 红细胞计数 一 实验目的：掌握红细胞计数原理和方法，熟悉红细胞参考值及临床意义。 二 实验原理：用红细胞稀释液将血液稀释一定倍数，置于血细胞计数板内，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，然后 再计算出每升血液内的红细胞数。 三 实验器材和试剂： 红细胞稀释液（0.85%NaCl）、显微镜、 小试管、 细胞计数板、盖玻片、微量吸管、试管架、采血针、小 玻棒、75%酒精棉球、小纱布、消毒干棉球、报告单。 四 实验步骤： 1.取试管1支，加红细胞稀释1.99ml。 2.消毒皮肤，用采血针刺破皮肤，使血液自动流出，拭去第一滴血，用一次性微量吸管准确取血10微升。 3.去管尖外部余血，轻轻注入红细胞稀释液底 部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。 4.倾斜试管用小玻棒沾取红细胞悬液，注入血细胞计池内，要求一次充好，不要产生气泡。静置2-3分钟，使红细胞完全沉降。 5.将计数板置于显微镜下用 高倍镜计数中央大方格红细胞计数区四个角和中间的一个中方格共5个中方格内 的红细胞。凡压在中方格边缘上的红细胞，以数上不数下，数左不数右的原则进行计数。 五 计算 R（五个中方格内RBC数） R×5×10×106×200= △.△△×1012个/升 式中： ×5：5个中方格内红细胞数换算为1个大方 格内红细胞数 ×10：1个大方格容积（0.1微升）换算成1微升 ×106：1微升换算为1升 ×200：血液稀释倍数 六 实验报告方式：△.△△×1012/L 七 正常参考值： 成年男性：4.00-5.50×1012/L 　　　　　　　 成年女性：3.50-5.00×1012/L 　　　　　　　 新生儿：6.00-7.00×1012/L 八 注意事项： 1.显微镜物镜接近计数板时应注意，勿损坏计数板及镜头。 2.计数时进入显微镜的光线要适中，否则不易找到方格。计数池内的细胞分布要均匀，各中方格的细胞相差不应超过±10%，否则重新计数。 3.试管、计数板须清洁，以免杂质、微粒等被误认为红细胞。 4.稀释倍数要准确。 5.计数完毕后，用清水将计数盘和盖玻片冲洗干净，待干后备用。 九 思考题： 1.计数不准确的常见原因有哪些？ 2.红细胞数增多减少的临床意义？ 实验三 白细胞分类计数 一 实验目的：掌握白细胞分类计数原理和方法，熟悉白细胞分类计数的参考值及临床意义。 二 实验原理：白细胞的胞质、胞核和胞桨颗粒等含有不同的化学成分，其与各种染料的亲和力不同。经染色后能着上不同的颜色，根据颜色的差异，可将白细胞区别并进行分类计数。 三 实验器材和试剂：显微镜 擦镜纸 75 ％酒精 推玻片 吸水纸 消毒干棉球