液相色谱概述与基本原理要点.ppt

定性定量计算 色谱定性、定量计算 常用的定量方法： 归一化法 假设试样中有n个组分，每个组分的质量分别为m1、m2、。。。各组分的含量总合为m（为100%），那么 组分i的质量分数wi为： 特点及要求：归一法简单、准确；进样两的准确性和操作条件的变动对测量结果的影响不大；适合用于试样中所有组分都出峰的情况。 定性定量计算 色谱定性、定量计算 常用的定量方法： 外标法 外标法也称标准曲线法，用欲测组分的纯物质配成不同质量 分数的标准溶液，取固定量标液进样分析，从所得色谱图上 测出响应信号（峰面积或峰高），然后绘制响应信号（纵坐 标）对质量分数（横坐标）的标准曲线。分析试样时，取和 制作标准曲线时同样量的试样（固定量进样），测得该试样 的响应信号，由标准曲线即可查出其质量分数。 定性定量计算 色谱定性、定量计算 常用的定量方法： 外标法 特点及要求：不适用校正因子，准确性较高；操作条件的变 化对结果准确性的影响较大；对进样量准确性的控制较高， 适用于大批量试样的快速分析。 定性定量计算 色谱定性、定量计算 常用的定量方法： 外标法 单点校正法 当被测试样中各组分浓度变化范围不大时，可不必绘制标准 曲线，而用单点校正法（比较法）。配制一个和被测组分含 量十分接近的标准溶液，定量进样，由被测组分和外标组分 峰面积比或峰高比来求被测组分的质量分数。 定性定量计算 色谱定性、定量计算 常用的定量方法： 内标法 当只需测定试样中某几个组分，而且试样中所有组分不能全 部出峰时，可采用此法。 所谓内标法是将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称 取的试样中，根据被测物和内标物的质量及其在色谱图上相 应的峰面积比，求出某组分的含量。 定性定量计算 色谱定性、定量计算 常用的定量方法： 内标法 试样配制：准确称取一定量的试样W，加入一定量内标物mS 定性定量计算 色谱定性、定量计算 常用的定量方法： 内标法 内标物需要满足的条件： 试样中不含有该物质；与被测组分的性质比较接近；不与试 样发生化学反应；出峰位置应位于被测组分附近，且没有其 它峰影响。 定性定量计算 色谱定性、定量计算 常用的定量方法： 内标法 内标法的特点： 内标法的准确性较高，操作条件和进样量的稍许变动对定量 结果的影响不大。 每个试样的分析，都要进行两次准确称量，不适合大批量试 样的快速分析。 若将内标法中的试样取样量和内标物加入量固定，则： 色谱法中基本术语 液相色谱中常用的术语和参数： 保留值：表示被测组分从进样到色谱柱后浓度出现最大值时所需要的时间，叫做保留值。 相对保留值：在一定色谱条件下被测化合物和标准化合物调整保留时间之比：r’i,s=t’R(i)/t’R(s) 说明：r’i,s值越大， 色谱法中基本术语 液相色谱中常用的术语和参数： 容量因子（K’）：是在平衡状态下组分在固定相与流动相中质量之比，即 K’=t’R /tM 色谱柱的柱效率和分离度 理论塔板数（n）：色谱柱的柱效率可以用理论塔板数（n） 或理论塔板高度（H）来表示 注：保留时间越长，Y或Y1/2越小，色谱峰越窄，理论塔板 数越多组分在两相间达到分配平衡的次数越多，分离能力越 强，柱效就越高。 色谱法中基本术语 液相色谱中常用的术语和参数： 色谱柱的柱效率和分离度 分离度（R）：又称分辨率是把柱效率和溶剂效率结合在一 起的参数，是表示色谱柱在一定的色谱条件下对混合物综合 分离能力的指标 分离度、柱效率、容量因子之间的关系： 液相色谱法的分类及其分离原理 液相色谱中常用的术语和参数： 液-固色谱法 液-液色谱法 离子交换色谱 凝胶色谱 液相色谱法的分类及其分离原理 液-固色谱法（液-固吸附色谱法） 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心，利用吸附剂 对不同成分之间吸附能力的差异而实现分离，固定相是固体 吸附剂，它是根据物质在固定相中的吸附作用 的不同进行分配的。 液-固吸附色谱法的作用机制 吸附剂：一些多孔的固体颗粒物质，其表面存在着分散的吸 附中心点。 流动相中的溶质分子（X）被流动相S带入色谱柱后，在随载 液流动的过程中，发生如下的交换反应： X（液相） +n S（吸附） == X （吸附） +nS （液相） 其作用机制是溶质分子 X（液相） 和溶剂分子S（液相）对 吸附剂表面的竞争吸附。 液相色谱法的分类及其分离原理 液-固色谱法（液-固吸附色谱法） 吸附反应的平衡常数是 K与组分的性质、吸附剂的活性、流动相的性质及温度有关。 K值较小：溶剂分子的吸附力很强，被吸附的溶质分子很 少 ，先流出色谱柱。 K值较大：表示该组分的分子的吸附能力较强，后流出色谱 柱。 发生在吸附剂表面的吸附-解吸附平衡，就是液-固色谱分离 的基础。 液相色谱法的分类及