实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法).pptVIP

实验前准备工作 部分同学的实验结果实例 部分同学的实验结果实例 三、实验材料 1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus） 2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗?酸泡?水洗?蒸溜水泡?酒精泡 染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH） 染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂） 四、实验方法 （一）半固体穿刺法观察运动性（无菌操作） 1、试管壁上标明BS及学号，用直的接种针?火焰灼烧柄及针?挑取一点枯草芽孢杆菌?沿轴心穿刺接种于半固体培养基中，深3?4厘米?37℃培养24?48小时（1周）后观察生长情况（下次课补记结果）。 2、每排找一个人按同样的方式穿刺接种金黄色葡萄球菌，并标明SA。 五、注意事项 1、穿刺接种时针及穿刺过程要直。 2、用于鞭毛染色的菌活力要强，操作时动作要柔和，因为鞭毛易脱落。 细菌鞭毛染色法 1、绘图表示所观察到的细菌菌体及鞭毛形态。 2、简述鞭毛染色的基本原理，鞭毛染色应掌握哪些环节？注意些什么问题？ 3、记录观察到的细菌运动性结果（下次补记）。 4、讨论实验成败的原因。 实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察 菌株的连续活化 染色液当天配制 无菌液（试管或三角瓶中）的准备 钾细菌的荚膜 水洗 不水洗 番红染色 枯草杆菌的芽孢 孔雀绿+番红染色 问题与建议 按要求准确操作是实验成功的关键 对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 实验七、细菌鞭毛染色和运动性观察（半固体穿刺法） 学习并掌握细菌的鞭毛染色法 观察细菌鞭毛的形态特征和着生方式 观察细菌是否运动来间接证明是否有鞭毛 了解细菌鞭毛染色的应用 一、实验目的 二、实验原理 细菌的鞭毛极细，直径一般为10～20nm；长度为15～20μm。 直径10～20nm 长度15～20μm。 光学显微镜下观察：特殊的鞭毛染色 在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径 变粗，然后再进行染色。 观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察 根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态 （在半固体培养基中呈扩散性生长） 暗视野显微镜或相差显微镜观察 鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义 单端鞭毛 端生丛毛 周生鞭毛 两端生鞭毛 了解细菌鞭毛染色的应用 （二）银染法 1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端，顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气，维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加热，用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。 六、视频 七、作业与讨论 实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察