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实验五 肝功能和两对半检查　　 要求 掌握血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定的原理和临床应用； 掌握两对半测定的实验原理和操作方法。 一、血清丙氨酸氨基转移酶（ALT)测定 一、ALT测定原理 二、操作方法 对照管 测定管（ml） 血清 0.10 0.10 谷丙基质液 0.50 混匀，37℃水浴 30分钟 2,4二硝基苯肼液 0.50 0.50 基质溶液 0.50 混匀，37℃水浴 20分钟 0.4N氢氧化钠溶液 5.00 5.00 混匀，37℃水浴 10分钟 500nm，对照管调0，观察测定管光度后，从标准曲线查ALT活力单位 注：共四份标本，每大组（4人）各做一个标本，整个实验室只作一份对照 二、参考值 ALT≤40U 酶的活力受温度和孵浴时间及PH等影响 ALT是肝细胞损伤最敏感指标之一也是判断急性肝炎是否恢复的很好指标 二、两对半测定 一、原理 HBsAg：双抗体夹心法；单克隆抗-HBs包被反应板，加入待侧标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP，当标本中存在HBsAg时，形成抗-HBs- HBsAg -抗-HBs-HRP 复合物，加入底物显色 抗-HBs：双抗原夹心法；纯化HBsAg包被，加入待侧标本，同时加入HBsAg-HRP，当标本中存在抗-HBs，形成HBsAg-抗-HBs- HBsAg-HRP复合物，加入底物显色 HBeAg：双抗体夹心法；单克隆抗-HBe包被，加入待侧标本，同时加入多克隆抗-HBe-HRP，当标本中存在HBeAg，形成抗-HBe- HBeAg -抗-HBe-HRP 复合物，加入底物显色 抗-HBe：中和抑制法；单克隆抗-HBe包被，加入待侧标本，同时加入重组HBeAg和多克隆抗-HBe-HRP，形成竞争结合，如标本中抗-HBe含量高，则抗-HBe-HRP与HBeAg结合后形成游离物被洗掉，显色淡 抗-HBc：竞争抑制法；重组HBcAg包被，加入待侧标本，同时加入抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如标本中抗-HBc含量高，则抗-HBc-HRP与HBcAg结合少，显色淡 二、操作 加待测标本0.05ml/孔 加酶结合物0.05ml/孔 混匀，37℃水浴 30分钟 洗板：弃去反应板孔内液体，拍干，洗涤液注满反应孔，静置5-10秒，弃液拍干，反复5次，拍干 加显色剂:先A 0.05ml/孔，再B 0.05ml/孔，混匀，37℃避光15分钟 终止：终止液0.05ml/孔 混匀 注：4份标本，每大组（4人）各做一个标本同时检测，每份标本都要做(+)(-)对照，共五个试剂盒。试剂不要弄乱，以防出错 三、注意事项 1.试剂使用前应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加，注意用力均匀 2.加入试剂后要充分混匀 3.结果判断10分钟内完成 4.按传染病实验室检查规程操作 临床意义 HBsAg 乙型肝炎表面抗原,存在于HBV的外壳部分。血清中检出HBsAg是乙肝的早期诊断指标之一 ，出现于患者血清转氨酶(ALT)升高前2~8周,到恢复期HBsAg滴度逐渐降低乃至消失 。仅为HBV感染的标志，不反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱及预后。 抗HBs 作为疫苗免疫机体产生的抗体,对HBV的感染具有保护性免疫作用。乙肝疫苗接种者一旦出现除抗HBs以外的标志物,则应视为既往感染。  HBeAg 在血清中的出现时间稍后于HBsAg,一般血清HBeAg阳性者,HBsAg亦为阳性。是HBV复制活跃的血清学指标，有传染性。急性乙肝患者血清HBeAg持续阳性3个月以上,则有疾病慢性化倾向。 抗HBe 当血清HBeAg转阴后,可出现抗HBe,说明病毒复制减少,传染性弱。抗HBe不是保护性抗体。 HBc 包括抗HBcIgM、IgA、IgG、和IgE等。抗HBc?IgM是机体感染后最早在血液中出现的特异抗体,急性乙肝时呈高滴度。随着急性乙肝的恢复,抗HBcIgM滴度(以及抗HBc?IgA)降低乃至消失。如持续高滴度,则有可能发展成慢性乙肝。研究发现,慢性活动性乙肝患者其抗HBcIgM滴度亦较高,说明HBV复制活跃,是传染性强的指标之一。抗HBc不是保护性抗体。抗HBc在血中呈低滴度且与抗HBs同