从掌叶大黄中提取的化合物对抗增殖雌激素受体基因的影响要点.doc

从掌叶大黄中提取的化合物对抗增殖雌激素受体基因的影响 掌叶大黄，在韩国是一种传统药材。在以前的研究中用于在重组酵母系统人雌激素受体（ER）表达质粒和质粒从二氯甲烷馏分分离已知蒽醌，大黄酚（1），大黄素甲醚（2），大黄素（3），芦荟大黄素（4）、大黄酸（5）化合物3具有最高的雌激素的相对效力（RP，17bestradiol?=?1）（6.3×10-2），其次是化合物4（3.8×10-3），化合物5（2.6×10-4），此外，二氯甲烷部位化合物3和组分3（包含化合物3）ER阳性（MCF-7）和阴性（MDA-MB-231）的乳腺癌细胞系对表现出较强的细胞毒作用关键词：掌叶大黄蒽醌类成分，酵母测定，雌激素样作用，抗增殖作用传统上，许多植物天然药物治愈许多疾病。包括乳腺癌（埃德勒克罗茨和哲，1997）利用现有的合成雌激素更年期雌激素替代疗法有一些副作用，包括乳腺癌和子宫内膜癌由于非选择性的雌激素样作用发风险显著增加（Colditz等人，1995，1992；亨德森等人，1988；博尔顿等人，1998）。一般来说，中药是不具有合成雌激素的副作用雌激素的成长女性男性生殖系统中许多目标的分化和功能起着重要的作用。雌激素还具有多种药理作用，如骨质量，维护保护心血管，脑保护（Smith，1994；Ciocca和roig，1995）。在更年期许多健康问题的风险，雌激素缺乏症，潮热，睡眠，阴道干燥，关节疼痛，情绪波动，骨密度，心血管疾病，等（埃克等人，1993；帕拉西奥斯，1999；赖默等人，2003）天然中草药，如掌叶大黄（蓼科），在中医通常应用于治疗在以前的研究中，筛查妇科癌症的雌激素活性和抗癌活性在体外用人乳腺，卵巢妇科肿瘤活性，宫颈癌和肺癌细胞株（Kang et al，2006）。，在.的根茎中含有一种活性成分（13，8-三羟基-6-甲基蒽醌），具有抗癌，抗菌，利尿剂和血管舒张的（Tsai and Chen, 1992; Liang et al., 1993; Koyama et al., 1988; Zhou and Chen,1988; Huang etal.1991)。也有报道，大黄素对HER-2/neu过度表达的肺癌细胞HER-2/neu基因过表达的乳腺癌细胞(Zhang and Hung, 1996; Zhang et al, 1998)。然而，大黄素外，其他雌激素和抗增殖的成分未知。探讨雌激素成分，人类雌激素受体表达载体和报告质粒重组酵母系统一个人类雌激素受体表达载体和报告质粒重组酵母制。此外用人乳腺癌细胞株MCF-7（ER阳性）和MDA-MB-231（ER）体外抗妇科癌症抗癌活性评估。大黄的根在牦牛龙寺传统中药市场凭证标本存放在药学院雌激素活性检测唐纳德博士从酿酒酵母获得bj3505（杜克大学医学中心的体育公司，美国）。重组酵母株孵化器选择性培养基含300?RPM的酵母氮基（没有氨基酸67毫克/毫升），1?%葡萄糖，L?-赖氨酸（36毫克/毫升）和L?-组氨酸（24毫克/毫升）。孵化后的酵母样品稀在一个600 nm的光密度值（OD值），0.25和100μL96孔培养板的选择培养基每个样品在quadruplicate assayed什么。β-半乳糖苷酶的活动100μL（Z缓冲（60毫米的磷酸氢二钠，磷酸二氢钠40毫米，10毫米氯化钾，硫酸镁，pH值7.0?2毫克/毫升）含邻硝基苯基-β-D-半乳糖苷（ONPG），0.1%十二烷基硫酸钠，β- toethanol mercap 50毫米和200?U /毫升（enzogenetics oxalyticase，科瓦利斯，OR）在同步titertek?MCC?344板每个孔od590?和od420的测量值(Kang et al., 2006)细胞增殖试验细胞增殖的体外实验MCF-7（ER阳性乳腺癌）磺基罗丹明B（SRB）法和MDA-MB-231（ER阴性的乳腺癌）细胞株（Skehan等人。，1990）。对于SRB法，在96孔培养板每100μL的细胞悬液（4-5万细胞/毫升）。二氯甲烷馏分（Fr.1~Fr.10）和化合物1-5直接添加到细胞孵育5%?Co2，37℃的条件下培育48?h?。细胞固定50μL的40℃的50%的三氯乙酸（TCA）1h?并且用自来水干燥。五十微升的SRB溶液（0.4%?1%乙酸）和细胞在室温下染色30分钟。残余的染料1%醋酸和板晾干。100μL Tris缓冲溶液（10毫米，pH 10.5）加入。光盘（外径各井）密度测定用微孔板仪在540 nm。光密度（OD）540 nm。 提取和分离根（2.4公斤）甲醇在室温下提取两次甲醇提取液蒸减压干燥，残留悬浮。最终的是正己烷，二氯甲烷，乙酸乙酯，正丁醇连续。蒸发压力下有机馏分提取物正己烷（13.5克），二氯甲烷（7.4克），乙