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试验分析方法 伊灵燕 一、取样时期：齐口花时采样。 二、测定指标（每处理茎/叶各称： 12个0.5g；4个1g；8个2g。叶绿素另取）： （一）形态指标 1、株高：用直尺测量 2、茎粗（最粗处）：用游标卡尺测量 3、节间长：株高/节数 4、叶长、叶宽、叶柄长：用直尺测量 5、植株鲜、干重：分为整株、根、地上部、菜薹重和叶重（包括叶片和叶柄） 6、比叶重：用打孔器，每个重复打20个圆片，烘干，称干重 （二）叶片色素：参照张宪政（1986）的方法， （三）品质指标：分为叶片和菜薹 1、硝酸盐：比色法（李和生，2000）。 2、抗坏血酸（VC）含量：比色法，李合生（2000） 3、可溶性糖：蒽酮比色法（李和生，2000）。 4、可溶性蛋白: 考马斯量兰比色法（李和生，2000）。 5、游离氨基酸：茚三酮显色法，李合生（2002） 6、类黄酮、可溶性酚：比色法 7、纤维素（薹干样0.2g）： 四、指标测定方法： 1. 叶绿素 参照张宪政（1986）的方法，菜心叶片鲜样0.5g浸泡在25ml丙酮/无水乙醇（1:1，V:V）溶液中，至叶片发白。测定OD645、OD663和OD440。 叶绿素a浓度（mg/L）＝12.7×OD663－2.69×OD645 叶绿素b浓度（mg/L）＝22.9×OD645－4.86×OD663 总叶绿素浓度（mg/L）＝8.02×OD663+20.20×OD645 类胡萝卜素浓度（mg/L）＝4.7× OD440－0.27×总叶绿素浓度 叶绿体色素的含量（mg/g）＝（ 色素浓度×提取液体积）/样品鲜重 2. 硝酸盐 比色法 李和生（2000） （1）500μg/ml硝态氮（NO3-）标准液：精确称取烘干至恒重KNO3 0.7221 g（0.8145g）溶于去离子水中，定容至200ml（100ml）。 （2）5%水杨酸-硫酸溶液：称取5g水杨酸溶于100ml浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱中保存1周有效。 （3）8%氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠溶于250ml去离子水. 1 标准曲线的制作： （1）吸取500μg/ml硝态氮（NO3-） 标准液1、2、4、6、8、10、12ml分别放入50ml容量瓶中，用去离子水定容至刻度，使之成10、20、40、60、80、100、120μg/ml硝态氮的系列标准溶液。 （2）吸取上述系列标准溶液0.1ml，分别放入刻度试管中，以0.1ml去离子水代替标准溶液作空白。再分别加入0.4ml 5%水杨酸-浓硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min，再加入8%NaOH溶液9.5ml，摇匀冷却至室温。显色液总体积为10ml。以空白做参比，在410nm波长下测定吸光度。以硝态氮浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。 2 样品中硝酸盐的测定 （1）样品液的制备：取一定量的植物材料剪碎混匀，精确称取材料2g，重复3次，分别放入3只刻度试管中，各加入10mL无离子水，封口，置入沸水浴中提取30min取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25mL容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。 （2）样品液的测定：吸取样品液0.1mL分别于3支试管中，然后加入5％水杨酸-硫酸溶液0.4mL，混匀后置室温下20min,再慢慢加入9.5mL 8％NaOH溶液，摇匀，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测其光密度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出硝态氮浓度，计算样品中的硝态氮含量。 式中：x为由回归方程计算出的硝态氮浓度，μg/ml；V1为样品定容体积，ml；W为样品重量，g；V2为测定取用的样品提取液体积，ml。 2. Vc含量的测定 比色法，李合生（2000） (1)1%草酸：1.4g草酸溶于100mL水 (2)2%草酸：2.8g草酸溶于100mL水 (3)30％硫酸锌：53.4g溶于100mL水 (4)15%亚铁氰化钾：17.2g溶于100mL水 (5)染料溶液：称取100mg 2，6－二氯酚靛酚和82mg碳酸氢钠溶于约60mL热水中，过滤定容至100 mL容量瓶中，倒人棕色试剂瓶存放于冰箱内。使用时稀释4倍，此溶液每毫升约相当于0.1mg的维生素C （6）抗坏血酸标准溶液：精确称取100mg分析纯抗坏血酸，溶于1％草酸，定容至100mL，再从中吸取5 mL，用1％草酸再稀释至100 mL，稀释后每毫升含抗坏血酸0.05mg（标准溶液在使用前临时配制)。 （7）二甲苯：分析纯 1.标准曲线 取具塞大试管6个.分别吸取抗坏血酸标准溶液0mL,lmL,2mL,2.5mL,3 mL,4 mL,用1％草酸补充至4mL。各管中抗坏血酸含量相应为0、0.05mg、0.10mg、0.125mg、0.15mg、0.20mg。各管中加人染料溶液2 m