发酵工艺学第二章资料讲解.ppt

Molecular experimental results are as follows:PCR amplification the six fragment and the electrophoretogram just like this. The six fragments were assembly by Gibson Cloning Kit. After the conjuation we get so many plasmid transfer on antibiotic plate. Colony PCR verification and the plasmid DNA verification the total length for the plasmid was about. Randomly selected four of clones, send HuaDa company to sequencing,find only the NO64 sequencing was just exactly match with the Design of the plasmid * * 微生物是无性繁殖，有性重组的限制性很大，这是迄今发现有杂交现象的微生物不多，妨碍了基因重组在微生物育种中的应用。原生质体提供了充分利用了遗传重组杂交的方法 * 酿酒酵母可以利用葡萄糖生产酒精，但不能利用淀粉和糊精，糖化酵母可以利用淀粉和糊精，将这两株菌融合可以直接月年个淀粉和糊精直接生产乙醇 * 2. 菌种保藏的方法 一种良好的菌种保藏方法 保持原菌的优良性状长期稳定 方法的通用性 操作的简便性 设备的普及性 （1）定期移植保藏法 操作方法： 将菌种接种在斜面、液体或穿刺培养基上，待生长完全后，置普通冰箱4℃保藏，湿度50％～70％以下，棉塞换成不通气橡皮塞更好。 优点：方便，不受条件限制，各类微生物均可。 缺点：时间短、传代多、易退化。 低温可减缓生长速度，单细胞仍有一定的活动条件，一般4～6个月必须传代一次。 青霉素生产菌的两个变异株A和B都可以保持高产形状。如果： 把A每隔两周传代1次，第10代降低75％，11代为50％，14代为33％。 把B保藏在4℃，产量不变。 （2）液体石蜡法 操作方法： 生长完全的斜面上覆盖无菌的液体石蜡，液面高于斜面1cm，普通冰箱保藏。 加上石蜡可防止培养基水分蒸发，也可隔氧，保藏时间1～2年，除石油发酵微生物外，各类微生物均可使用。 注意：石蜡的纯度 （3）砂土保藏法 操作方法： 沙和土用酸浸泡去除其中的有机质，洗涤中和，干燥，分装于安瓶管内，加塞灭菌，把健壮的孢子悬液滴于砂土中搅拌均匀，真空干燥后封口，置于冰箱或干燥器中。 优点：低温、干燥、无氧、无营养，保藏效果好，时间可达几年至数十年。 缺点：只适用于产孢子的微生物，不能用于保藏营养细胞。 （4）冷冻干燥保藏法 操作方法： 是将液体样品（含保护剂的菌悬液）在冻结状态下升华其中水分，最后达到干燥。培养物用无菌脱脂牛奶—保护剂制成菌悬液，加入安瓶中，冷冻、抽真空、封口。 优点：低温、干燥、无氧、有保护剂，可保藏各大类微生物，保藏时间可达几十年，是目前使用最广、最有效的保藏方法。一般专业机构大都使用此法保藏。 缺点：不能保藏真菌菌丝。 （5）液氮保藏法 操作方法： 液氮温度可达－196℃。把菌悬液密封于安瓶中，置液氮罐内保藏。 优点：保藏效果好。 缺点：价格昂贵。 （6）基因工程菌保藏 携带外源基因的重组质粒通常是不稳定的，容易丢失。一般情况，细胞丢失了质粒，生长会加快。 基因工程菌的保藏是利用在抗性培养基中只有含重组质粒的细胞才能生长的原理 。 由于微生物的多样性，不同的微生物往往对不同的保藏方法有不同的适应性，迄今为止尚没有一种方法能被证明对所有的微生物均适宜。因此，在具体选择保藏方法时必须对被保藏菌株的特性、保藏物的使用特点及现有条件等进行综合考虑。对于一些比较重要的微生物菌株，则要尽可能多的采用各种不同的手段进行保藏，以免因某种方法的失败而导致菌种的丧失。 感 谢 倾 听 ！ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 菌种在发酵中起着关键的作用，它决定了发酵产品是否有产业化价值和商业化潜力的关键，是发酵工业的灵魂。青霉素1929年弗莱明发现1－2U/ml 经过60多年诱变育种60000U/ml 产量提高几万倍。 *