化学分离资料讲解.ppt

毛细管电泳分离法 电泳分离是依据在电场中溶质不同的迁移速率。毛细管电泳分离法是在充有合流动电解质的毛细管两端施加高电压，利用电位梯度及离子淌度的差别，实现流体中组分的电泳分离。对于给定的离子和介质，淌度是该离子的特征常数，是由该离子所受的电场力与其通过介质时所受的摩擦力的平衡所决定的。 本章作业 P 4 P9 P 12 P10 P 15 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二. 纸上色谱分离法 1．方法原理 2．比移值 3. 应用 1．方法原理 原理：纸上色谱分离法是根据不同物质在固定相和流动相间的分配比不同而进行分离的。 固定相：滤纸——利用纸上吸着的水分(一般的纸吸着约等于自身质量20％的水分) 流动相：有机溶剂 简单装置如图8—5所示 操作：点样、展开、干燥、显色得到如图8 — 6所示的色谱图、测定（定性和定量） 纸上色谱分离装置 1. 层析筒 2. 滤纸 3. 原点 4. 展开剂 5. 前沿 6，7. 斑点 展开方式 上行法：展开速度慢、容易达到平衡，分离效果好 下行法：展开速度快、适用于易分离的组分分离 双向法：使用两种展开剂、90度展开、适用于难分离的混合物的分离 2．比移值 比移值〔Rf)：Rf＝a／b a为斑点中心到原点的距离cm b为溶剂前沿到原点的距离cm Rf值最大等于1 ，最小等于。 Rf值是衡量各组分的分离情况的数值 Rf值相差越大，分离效果越好 使用Rf值定性 3. 应用 甘氨酸、丙氨酸和谷氨酸混合氨基酸的分离 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝4：1：2 显色：三茚酮 葡萄糖、麦芽糖和木糖混合糖类的分离 展开剂：正丁醇：冰醋酸：水＝4：1：5 显色：用硝酸银氨溶液喷洒，即出现Ag的褐色斑点。 定性：由Rf值可判断是哪种糖；葡萄糖的Rf为0.16，麦芽糖的Rf为0.11．木糖的Rf是0.28。 三. 薄层色谱分离法 （一）薄层色谱法的特点 （二）方法原理 （三）固定相和展开剂 （四）应用 薄层色谱法的特点 设备简单，操作方便。只须一块玻璃板和一个层析缸。 分析原理与经典柱上色谱相同、但是在敞开的薄层上可以检查混合物的成分是否分开可观察。 快速，展开的时间短。比纸上色谱快速。一般纸上色谱需要几小时至几十小时薄层色谱一般只需十几分钟或几十分钟。 使用无机吸附剂，薄层色谱可以采用腐蚀性的显色剂，如浓硫酸、浓盐酸和浓磷酸。对于特别难以检出的化合物，可以喷以浓硫酸，然后小心加热，使有机物碳化，显棕斑点，纸纸上色谱则无法检出。 广泛地选用各种固定相，比纸上色谱有显著的灵活性。广泛地选用各流动相，比气相色谱灵活。 薄层色谱法的特点 纸上色谱法斑点的扩散作用严重，降低了单位面积小样品的浓度，降低检出灵敏度。薄层色谱法扩散作用较少，斑点比较密集，检以灵敏度较高。 薄层色谱法适于分析小量样品(一般儿到几十微克，甚至小到上述的l-11)，也适于大量样品的分离（可以分离出几毫克甚至几十毫克组分）。 可以采用多种展开方式：如，双向展开，多次展开，分步展开，连续展开；分离原理是的物理化学原理，例如，吸附色谱，分配色谱，离于交换，薄层电泳，薄层等电聚焦。 适于分析热不稳定，难挥发的样品。 （二）方法原理 原理： 薄层色谱分离法是将固定相吸附剂均匀地涂在玻璃上制成薄层板，试样中的各组分在固定相和作为展开剂的流动相之间不断地发生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配过程。不同物质上升的距离不一样而形成相互分开的斑点从而达到分离。 操作方法：同纸上色谱法 展开方法 展开方法 展开缸和展开槽展开 （三）固定相和展开剂 1. 固定相： （1）硅胶：微酸性极性固定相，适用于酸性、中性物质分离（可以制备成酸度不同或碱性硅胶扩大使用范围） （2）氧化铝：碱性极性固定相，适用于碱性、中性物质分离（可以制备成中性或酸性氧化铝扩大使用范围） （3）聚酰胺：含有酰胺基极性固定相，适用于酚类、醇类化合物的分离 （4）纤维素：含有羟基的极性固定相，适用于分离亲水性物质 根据制备方法不同，吸附剂又可以分为不同的活性，如：硅胶和氧化铝可以分为五级 2. 展开剂： 展开剂对被分离物质有一定的解吸能力和溶解度。 极性比被分离物质略小。