中国水仙居群遗传多样性ISSR.docVIP

中国水仙居群遗传多样性的ISSR分析 摘 要 本实验利用issr分子标记技术研究5个中国水仙（narcissus tazetta var. chinensis boemchen）居群的遗传多样性。从40个随机引物中筛选出8个有效引物，共扩增出69个可分析位点，其中多态位点65个，多态性条带比率（ppl）为94.20%。实验表明基因分化系数（gst）平均值为0.0622，居群间的基因流（nm）为7.5378，上述结果表明中国水仙居群的遗传变异大部分存在于居群内部，5个居群间的基因交流很高，种群间的分化很少。 关键词 中国水仙 居群 issr 遗传多样性 issr analysis on chinese narcissus group genetic diversity zheng qinfang, wang saijiao, zhou gaixiao, zheng weihong (college of life and environmental sciences, wenzhou university, wenzhou, zhejiang 325000) abstract in this study, study on issr markers of five chinese narcissus (narcissus that tazetta var chinensis, the boem chen) population genetic diversity. the eight primers selected from 40 random primers amplified a total of 69 analyzed sites of polymorphic loci and 65, the percentage of polymorphic bands (ppl) is 94.20%. experiments show that the average gene differentiation coefficient (gst) was 0.0622, gene flow among populations (nm) 7.5378, the above results show that xianju group of chinese water most of the genetic variation within populations, five genes among populations the exchange of high population differentiation. key words chinese narcissus; droup; issr; genetic diversity 中国水仙（narcissus tazetta var. chinensis boem chen）为石蒜科（amaryllidaceae）水仙属多花水仙的一个变种，主要分布在我国的福建、浙江、江苏和台湾、上海等地。中国水仙栽培历史悠久，但是由于中国水仙为三倍体，很难自然和人工杂交产生新品种，而且新品种培育困难，导致数百年来中国水仙品种稀少，少有创新，乃中国水仙一大遗憾。并且近年来中国水仙野生资源丧失严重。因此，很有必要对中国水仙的遗传多样性进行深入研究。 简单序列重复间区（inter-simple sequence repeat，issr）是目前常用的分子标记技术。issr是在ssr的3’端或5’端加锚1~4个嘌呤或嘧啶碱基，并以此作为引物，一般为16~18个碱基序列，对两侧具有反向排列ssr的一段dna序列进行扩增。再根据谱带的有无及相对位置，来分析不同样品间的多态性。这种分子标记方法具有简便、耗资少、模板dna用量少、多态性高等优点，已广泛用于生物品种和居群间的遗传多样性研究。 1 材料和方法 1.1 植物材料 实验材料中国水仙的采集均利用植物遗传多样性的策略进行。每个居群采取20~30个体的叶片，分别装袋，硅胶干燥，并置于-70℃超低温冰箱中保存、备用。 1.2 方法 1.2.1 基因组dna提取 采用biospin植物基因组dna试剂盒法提取，具体操作步骤参照厂家说明。每个居群20个样本，共提取100个dna基因组。 1.2.2 pcr扩增 在预备实验中，对40个issr引物进行筛选，各选出8个能扩增出条带清晰且具多态性带型的引物。根据pcr正交试验设计，选取最佳组合的反应浓度。25 l issr-pcr体系中，dntp的浓度200 mol·l-1，引物浓度1.6 mol·l-1，mg2+浓度2.0mmol·l-1，taqdna 聚合酶1.5u，模板dna浓度为9 ng/ l。 issr扩增程序：