乳糖化去甲斑蝥素硕士论文：乳糖化去甲斑蝥素;三甲基壳聚糖;肝靶向;纳米粒.docVIP

乳糖化去甲斑蝥素乳糖化去甲斑蝥素; 三甲基壳聚糖; 肝靶向; 纳米粒乳糖化去甲斑蝥素N-三甲基壳聚糖纳米粒的研究 　　【摘要】 目的合成中性条件下有良好溶解特性的N-三甲基壳聚糖(N-trimethylchitosan, TMC)，并以其为载体，以具有主动肝靶向的乳糖化去甲斑蝥素为模型药物，制备乳糖化去甲斑蝥素三甲基壳聚糖纳米粒(Lactosyl-norcantharidin-associated N-trimethyl chitosan nanoparticles，Lac-NCTD-TMC-NPs),从纳米粒的被动靶向和Lac-NCTD的主动靶向两个方面，达到药物在体内的双重肝靶向识别，增加Lac-NCTD的抗肝癌疗效。方法(1)通过烷基化反应，在壳聚糖的自由氨基上连接上三个甲基，得到N-三甲基壳聚糖。经红外光谱、~1HNMR表征确证N-三甲基壳聚糖的结构，并通过特性黏度测定三甲基壳聚糖的分子量。以N-三甲基壳聚糖为载体，采用离子交联法制备乳糖化去甲斑蝥素三甲基壳聚糖纳米粒，通过单因素和正交设计等方法优化纳米粒的处方工艺。利用红外光谱等技术对纳米粒进行表征，并考察不同介质中纳米粒胶体的释放特性。(2)以Caco-2细胞为模型，评价Lac-NCTD及其纳米粒的吸收情况。考察了时间、温度、浓度、外排作用对药物摄取... 更多还原 　　【关键词】 乳糖化去甲斑蝥素; 三甲基壳聚糖; 肝靶向; 纳米粒; 　　中文提要4-6 　　Abstract6-7 　　引言12-21 　　第一章 三甲基壳聚糖的合成及纳米粒的制备21-34 　　材料21 　　方法与结果21-33 　　一、N-三甲基壳聚糖的制备21-22 　　二、N-三甲基壳聚糖的结构表征22-24 　　1. 红外(FT-IR)图谱22-23 　　2. 核磁共振(1HNMR)图谱23 　　3. 黏度和分子量计算23-24 　　三、纳米粒的制备24-30 　　1. 乳糖化去甲斑蝥素的含量测定24-25 　　1.1 HPLC 色谱条件24 　　1.2 标准曲线24 　　1.3 精密度24-25 　　1.4 回收率25 　　2. 制备方法25 　　3. 质量评价25-26 　　3.1 粒径分布和多分散指数25 　　3.2 包封率25 　　3.3 载药量25-26 　　4. 纳米粒的制备处方优化26-28 　　5. 优化的纳米粒制备工艺28-30 　　5.1 纳米粒粒径28 　　5.2 红外表征28-29 　　5.3 透射电镜表征29-30 　　四、N-三甲基壳聚糖纳米粒的体外释放特性30-33 　　讨论与小结33-34 　　第二章 乳糖化去甲斑蝥素及纳米粒的吸收机制研究34-55 　　材料34-35 　　方法与结果35-53 　　一、Caco-2 细胞模型的建立和验证35-38 　　1. 细胞培养条件35 　　2. 细胞模型的验证35-38 　　2.1 细胞形态和酶表达情况35-36 　　2.2 TEER(跨膜电阻值)测定36-37 　　2.3 电镜观察细胞单分子层形态与结构37 　　2.4 酚红转运37-38 　　二、乳糖化去甲斑蝥素及纳米粒在 Caco-2 细胞模型中的摄取38-47 　　1. 乳糖化去甲斑蝥素细胞样品的高效液相色谱分析方法的建立38-40 　　1.1 HPLC 色谱条件38-39 　　1.2 线性范围39 　　1.3 回收率和精密度39-40 　　2. MTT 实验40-41 　　3. 摄取实验41-47 　　3.1 时间对摄取的影响41-42 　　3.2 浓度对摄取的影响42-43 　　3.3 介质 pH 值对摄取的影响43 　　3.4 温度对摄取的影响43-44 　　3.5 外排抑制剂对摄取的影响44-45 　　3.6 纳米粒的细胞摄取实验45-46 　　3.7 FITC 标记纳米粒的制备及摄取实验46-47 　　三、乳糖化去甲斑蝥素及纳米粒在 Caco-2 细胞模型中的双向转运47-53 　　1. 转运实验中乳糖化去甲斑蝥素高效液相色谱分析方法的建立47-48 　　1.1 HPLC 色谱条件47 　　1.2 线性范围47-48 　　1.3 回收率和精密度48 　　2. 转运实验48-53 　　2.1 浓度对转运的影响48-49 　　2.2 外排作用对药物转运的影响49-50 　　2.3 细胞内吞和旁路转运对药物转运的影响50-51 　　2.4 纳米粒的转运实验方案51-53 　　讨论与小结53-55 　　第三章 纳米粒的体外药效学和靶向性评价55-69 　　材料55-56 　　方法与结果56-68 　　一、对肝肿瘤细胞的毒性56-58 　　二、凋亡检测58-61 　　1. Hochest33258 染色58-59 　　2. 流式细胞术检测细胞凋亡(Annexi