B型钠尿肽抑制心脏成纤维细胞增殖机制及和TGF-β、钠尿肽受体的关系.pdf

摘要 natriuretic 目的：探讨B型钠尿肽(Brain／B-typepeptide，BNP)抑制心脏成纤维细 胞(Cardiac peptidereceptors，NPRs)的信号转导途径的关系。 方法：采用胰酶消化法和差速贴壁法提取原代乳鼠心脏成纤维细胞并纯化，以 形态学及免疫组织化学进行细胞鉴定：原代CFs经无血清DMEM培养24h同步 1542和BNP+CANF4．23 peptidereceptor-A，NPR．A)抑制剂CANF4-23、BNP+SB-43 干预，放射免疫检测cGMP；以CFs为对象，同步化处理后，用CT-1刺激增殖 组，干预后收集培养液检测细胞因子TGF．131浓度。收集细胞提取总RNA，逆 1 BNP+SB-43542组smad4mRNA变化。 结果：1．采用胰酶消化法和差速贴壁法原代提取纯化的CFs存活率高，纯度好。 2．不同浓度的BNP对CT-1刺激细胞增殖的抑制程度不同，随着BNP浓 度减小，抑制CT-1刺激心肌成纤维细胞的增殖作用减弱，存在明显的剂量依赖 效应，但两者并非简单的反比关系，在5×10。6～5×10。7mol／L时变化最显著。 3．各实验组在加药后CFs胞内cGMP水平变化不一，BNP组和 BNP+SB-431542组胞内cGMP水平分别为6．16士1．30 pmol／ml和6．01土1．17 和BNP+SB．431542组之间没有显著区别。其他各药物组与对照组相比没有显著 差异(尸0．05，甩=6)。 相比明显降低(氏0．05)，但不同药物组之间没有显著差异(胗O．05)。BNP组、 SB．431542组、BNP+SB一431542组三组较正常组smad4mRNA水平明显下降 1 (氏0．05)，并且BNP+SB．43542组smad4mRNA表达水平显著低于BNP组和 6 SB．431542组(P0．01)，而后两者smad4 mRNA表达无明显差异(尸0．05)。 结论：1．BNP抑制CT-1刺激增殖的CFs有剂量依赖性，但非普通的正比关系， 可能与CF膜表面NPRs受体有关。 TGF．BI型受体特异性抑制剂不能改变CFs胞内cGMP水平。 3．BNP能抑制CFs胞内Smad4mRNA的表达量显著低于SB．431542作用， TGF．13非smad2／3信号传导途径。 关键词：BNP：CFs；CANF4．23；SB．43 中图分类号：R541文献标识码：A 7 Abstract theeffectof natriureticincardiacfibroblasts Objective：Toinvestigate B-type peptide andthe transduction proliferationpossiblesignal pathways． cardiacfibroblastswereisolated and Methods：Primary trypsindigestion by purified， andwereidentified and a24h bymorphology serum-freeDMEMtreated谢th fibro