MicroRNA-124和脑缺血后脑室下区神经干细胞增殖分化关系的初步探讨.pdf

摘要 摘要 研究背景和目的： 脑血管病严重危害人类的健康，发病率逐渐增加，给家庭和社会带来沉重 负担。虽然近年对于脑卒中的治疗取得了一定的进展，但其预后仍不尽人意， 尤以缺血性脑卒中的预后差。缺血后大量脑神经元细胞因缺血缺氧损伤而发生 不可逆性的变性坏死，终致严重的神经功能缺失。近年来研究发现，啮齿类、 非人灵长类、人类成年侧脑室室下区(subventricular zone，SVZ)和海马齿状回 (dentate zone，SGZ)存在神经干细胞(neural gyrus，DG)亚颗粒区(subgranular stem cells，NSCs)或神经祖细胞(neuralcells，NPCs)。这些NSCs progenitor 在脑缺血后被激活，增殖分化成功能上成熟的神经元，整合到固有神经网络中， 可一定程度上起到部分补充并修复神经损伤的作用。但是脑缺血后自身NSCs 增殖分化能力十分有限，还远不能达到临床治疗要求。故而，最大限度地提高 脑缺血后NSCs增殖分化能力是治疗的关键，而深入探讨脑缺血后成体NSCs增 殖分化的分子调控机制则是我们解决这一问题的基础和前提。 非编码RNA，可通过转录后水平调控靶基因蛋白的表达，其参与了多种生物学 过程，发挥着重要的生物学功能。miR．124为脑组织特异性表达的miRNAs，其 nervous 在中枢神经系统(centralsystem，CNS)内含量非常丰富，据必威体育精装版研究报道， 生改变，其是否仍然参与调控NSCs增殖分化过程，目前报道甚少。本研究通过 检测脑缺血后不同时间点缺血SVZ区miR．124及其靶基因Sox9mRNA的表达 水平，初步探讨微小RNA对脑缺血后NSCs增殖分化的调控作用。 研究内容和方法： 1．脑缺血Sprague．Dawley(SD)大鼠模型的建立和实验分组 SD大鼠随机分假手术组和脑缺血组，缺血组采用线栓法制作大鼠大脑中动 cerebral 脉栓塞(middle arteryocclusion，MCAO)模型，于大脑中动脉栓塞再灌注后 不同时间点(1d、3d、7d)处死，取脑组织SVZ区标本待检。 lI 摘要 2．脑缺血后SVZ区内源性NSCs的增殖情况 采用免疫荧光染色检测假手术组、脑缺血组不同时间点SVZ区Nestin阳性 细胞的表达。 3．脑缺血后SVZ区miR-124表达变化 PCR方法检 取假手术组、脑缺血组各不同时间点SVZ标本，采用real—time 测脑缺血各组miR-124表达水平。 mRNA表达变化 4．脑缺血后SVZ区miR．124靶基因Sox9 PCR方法检 取假手术组、脑缺血组各不同时间点SVZ标本，采用real-time mRNA表达水平。 测脑缺血各组Sox9 结果： 1．成功建立脑缺血SD大鼠模型 MCAO大鼠均出现程度不等的对侧肢体偏瘫、向对侧倾斜等神经功能缺失 chloride，TTC) 表现。2，3，5一氯化三苯基四氮唑(2，3，5-triphenyl-2h-tetrazolium 染色可见右侧缺血区呈苍白色，正常脑组织呈粉红色。脑缺血损伤模型制作成 功。 2．内源性NSCs的增殖情况 细胞数显著高于假手术组。阳性细胞计数分别为假手术组的3．0士0．13、4．54-0．24、 6．5+0．29倍。结果提示，脑缺血后可诱导SVZ区NSCs增殖。