大鼠脑损伤后iNOS和MAP-2的表达及和损伤时间的关系.pdf

摘要 大鼠脑损伤后iNOS和MAP．2的表达及其与损伤时间的关系 研究生韩宁娟 导师张广政 郑州大学基础医学院法医学教研室 河南郑州450001 摘要 背景与目的 随着我国经济的快速增长，社会活动的频繁增加，尤其是交通事业的快速 发展，使颅脑创伤成为一种常见的损伤。另外，脑挫伤也是法医学检案实践中 常见的一种机械性脑损伤，因此要建立一个适当的、符合实际且理想的脑损伤 (TraumaticBrain 建立了大鼠脑组织挫伤模型，该模型可以模拟类似于人类临床上见到的脑挫伤 的局灶性损伤。但是该模型在应用当中还存在一些不足，比如易于出现二次反 弹的损伤。本实验参照Edward介绍的方法，采取颅骨开窗的打击方式，目的是 为了尽量保证动物之间损伤的部位和损伤的程度相保持一致。 脑挫伤(braincontusion)是一种常见的原发性脑损伤，指由于外力作用后 脑组织在颅内作直线加速或减速运动，或旋转运动，脑表面与颅骨内面或颅底 碰撞、摩擦而形成。其症状一般表现为不同程度的意识障碍，更严重者可导致 nitricoxide 死亡。正常情况下，脑组织内没有诱导型一氧化氮合酶(inducible synthase，iNOS)蛋白的表达，在炎症、缺血、缺氧及创伤情况下受损伤周围会出 现iNOS蛋白的阳性表达，并呈现一定的时间规律性，其细胞定位主要是部分神 经细胞、星形胶质细胞、小胶质细胞及炎性浸润的中性粒细胞及巨噬细胞。微 管相关蛋白2(microtubule．associatedprotein2,MAP．2)是一种热稳定的磷蛋白，属 于结构性微管相关蛋白家族，主要存在于中枢神经系统神经元胞体和树突，是 哺乳动物脑中最丰富的蛋白之一。MAP．2是神经元缺血损伤的敏感指标，可作 为颅脑创伤神经元损伤的早期标记物。 摘要 本实验通过模拟大鼠脑挫伤模型，应用免疫组织化学(SP)染色的方法， 检测实验性大鼠脑挫伤后不同时间内iNOS和MAP．2蛋白表达及其与损伤经过时 间的关系，可望为法医学实践中对颅脑损伤时间的推断提供科学的理论依据。 方法 1、将实验动物随机分为对照组(5只)和实验组，实验组按损伤后3d,时、 6小时、12d时、1天、3天、5天、7X和14天8个时间点分组，每组6只。 2、利用改造的Edward自由落体装置，撞击大鼠头部制造脑挫伤模型，记录 动物的行为学变化，在相应时间点取脑组织，并固定做石蜡埋块。 3、在HE染色观察的基础上，采用免疫组化(SP法)观察损伤后不同时间内 Plus 5．0进行图像分析，测 iNOS和MAP-2蛋白阳性表达的变化，利用Image．Pro 量挫伤灶周围iNOS和MAP．2的阳性细胞率，并记录实验数据。 4、统计分析：所有数据用x士S表示，用SPSSl2．0统计软件对数据进行单因 素方差分析，采用LSDr法进行两两比较，检验水准a=0．05。 结果 1、损伤后行为学观察： 受打击损伤后多数大鼠出现短暂昏迷，心率发生改变，自主呼吸由慢接近 正常，苏醒后缓慢跑动，且反应迟钝。 2、髓染色结果变化： 损伤后早期(1d)，可见挫伤周围局部蛛网膜下腔出血，大脑皮层内有多 个大小不一、散在的出血灶，部分伴有脑组织轻度水肿。在伤后3天，大脑皮质 及海马内可见以神经元细胞肿胀、变性、坏死，周围胶质细胞增生为主要病理 改变。脑损伤后7天，脑组织内坏死神经元增多，呈灶状，胶质细胞反应性增生， 可见明显的胶质瘢痕。对照组末见明显改变。 3、免疫组织化学染色观察： 损伤后iNOS的表达变化观察，对照组中未见着色阳性细胞出现，而在实验 组的挫伤灶周围区域，皮质、海马和齿状回及胼胝体存在iNOS阳性染色细胞， 表达区域主要集中在损伤皮质周围及海马。脑创伤后i