肝缺血再灌注后HMGB-1+mRNA和蛋白的表达及和细胞凋亡关系研析.pdf

硕士研究生论文 肝缺血再灌注后HMGB．1mRNA和蛋白的表达及其与细胞凋亡关系的研究 及其与细胞凋亡关系的研究 摘要 目的 本实验通过检测临床肝脏手术中不同时期患者肝组织中HMGB．1的含 量、HMGB．1 手术中肝缺血再灌注损伤的作用及其与细胞凋亡的关系。为临床选用有效 的预处理方法，从而抑制细胞凋亡、减轻肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemic reperfusioninjury，HIRI)提供理论基础。 方法 肝胆外科住院，行肝段切除的肝细胞癌患者36例，患者术前均未行灌注化 疗及栓塞治疗，术中均采用Pringle’s法阻断肝门。在肝切手术中，分别在 肝门阻断前、肝门阻断开放时、手术结束关腹前切取肝组织109。分为两份， 一份用4％多聚甲醛固定，制作石蜡标本。另一份置于。70C冰箱中保存， 用于提取总RNA。所取标本均经患者本人同意及医院伦理委员会审查同意。 mRNA表达。 2．逆转录聚合酶链反应(RT．PCR)法检测HMGB．1 3．脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(Terminal． transferasemediated end deoynucleotidle d．UTPnick 定肝组织中肝细胞凋亡。 4．免疫组织化学法(S．P法)测定肝组织中HMGB．1蛋白的表达。 结果 。- 硕上研究生论文 肝缺血再灌注后HMGB．1 mRNA和蛋白的表达及其与细胞凋亡关系的研究 93 肝门开放时为1．0703+0．1l，关腹前为1．4028士0．2150。这三个组间的差异 时少，关腹前HMGB。lmRNA的表达要比肝门开放时增加。 Index，AI)为 2．肝细胞凋亡，在肝门阻断前的凋亡指数(Apoptotic 胞凋亡指数在这三个组间的差异有统计学意义(pO．05)。肝门阻断前的肝 细胞凋亡指数高于肝门开放时和关腹前；而肝门开放时肝细胞凋亡指数高 于关腹前。 3．HMGB．1蛋白的表达用免疫组化染片的分值表示。在肝门阻断前为 腹前比肝门开放时显著增加，在肝门开放时比肝门阻断前增加。 断前肝组织HMGB．1 mRNA的表达与肝细胞凋亡的相关系数f—O．831，(p O．05)；呈负相关。③肝门开放时肝组织HMGB．1mRNA的表达与肝组 开放时肝组织HMGB．1 mRNA的表达与肝细胞凋亡的相关系数丫=．0．878， mRNA的表达与肝组 (pO．05)；呈负相关。⑤关腹前肝组织中HMGB．1 组织HMGB．1 呈负相关。 结论： 肝脏缺血再灌注损伤的早期，肝组织中HMGB．1 达增加，且呈上升趋势，提示HMGB．1与HIRI的发生和发展有一定的关系。 -气一 硕士研究生论文 肝缺J舡再灌注后HMGB．1mRNA和蛋白的表达及其与细胞凋亡关系的研究 2．肝门阻断引起缺血再灌注损伤后，随着肝组织中HMGB．1mRNA和 蛋白的表达增加肝细胞凋亡指数减少(呈负相关)。说明HMGB．1蛋白表达 的增加，可能具有一定抑制细胞凋亡作用。 关键词肝脏，缺血再灌注损伤，HMGB．1，细胞凋亡 硕=l：研究生论文 肝缺血冉灌注后HMGB-l mRNA和缝白的表达及其与细胞凋亡关系的研究 RESEARCHoFTHE OF