肝缺血再灌注后HO-1+mRNA和蛋白的表达及和细胞凋亡关系的临床的研究.pdf

硕上研究生论文 肝缺血再灌注后HO．1mRNA和蛋白的表达发其与细胞凋l’：关系的临床研究 肝缺血再灌注后HO．1mRNA和蛋白的表达及 其与细胞凋亡关系的临床研究 中文摘要 目的：通过检测肝组织在缺血再灌注后血红素氧合酶．1(Heme 织对缺血再灌注的反应及HO一1蛋白与肝细胞凋亡之间的关系。为选用有效 的预处理方法、抑制细胞凋亡、减轻肝脏缺血再灌注损伤(Hepatic Ischemic-ReperfusionInjury，HIRI)提供理论基础。 方法： 1、标本采集：在肝切手术中，分别肝门阻断前、肝门阻断开放同时、 手术结束关腹前取切缘旁2cm肝组织109。分为两份，一份用4％多聚甲醛 固定，制作石蜡标本。另一份置于．70(2冰箱中保存，用于提取总RNA。另 外分别于肝切手术开始前、术后第一、四、七天取患者外周静脉血5ml。 2、逆转录聚合酶链反应(I弭PCR)法检测HO．1mRNA表达。 3、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(Terminal． transferasemediatedd．UTPnickend deoynucleotidle 定肝组织中肝细胞凋亡。 4、免疫组织化学法(S-P法)测定肝组织中HO．1蛋白的表达。 aminotrans． 5、用自动生化分析测定血浆丙氨酸氨基转移酶(Alanine ferase，ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate 血清总胆红素(TotalBilirubin，TB)。 结果： 2 硕_上研究乍论文 肝缺血再灌注后HO．1mRNA和蛋白的表达及其与细胞凋广关系的临床研究 mRNA的表达比肝门开放时减少， 计学意义(pO．05)。肝门阻断前HO．1 关腹前HO．1mRNA的表达要比肝门开放时增加。 2、肝细胞凋亡，在肝门阻断前的凋亡指数(ApoptoticIndex，AI)为 胞凋亡指数在这三个组间的差异有统计学意义(PO．05)。肝门阻断前的肝 细胞凋亡指数高于肝门开放时和关腹前；而肝门开放时肝细胞凋亡指数高 于关腹前。 3、HO．1蛋白的表达用阳性面积和累积光密度(IntegratedOptical 织中HO．1表达的阳性面积和IOD在关腹前比肝门开放时显著增加，在肝 门开放时比肝门阻断前增加。 一天、第四天、第七天都增加(pO．05)，术后第一天√6岍达到一个峰值， 术后第一天达到一个峰值，随后逐渐下降。在术后第七天与手术前相比差 O．05)，在术后第一天逐渐升高，到术后第四天到达一个高峰，在术后第七 天与术后第一天相比差异没有统计学意义(pO．05)。 5、相关性分析： ①肝门阻断前肝组织中HO．1mRNA的表达与肝组 门阻断前肝组织HO．1 mRNA的表达与肝细胞凋亡的相关系数丫=．0．961， 3 肝缺血再灌注后HO-l mRNA和蛋白的表达及其与细胞凋I、：关系的临床研究 mRNA的 矿o．000(po．05)；呈高度负相关。⑨肝门开放时肝组织HO．1 正相关。④肝门开放时肝组织HO．1mRNA的表达与肝细胞凋亡的相关系 呈高度正相关。⑥关腹前肝组织HO．1 mRNA的表达与肝细胞凋亡的相关 系数7-=．0．962，P=O．000(pO．05)；呈高度负相关。 结论： 1、在正常的肝组织中只有少量HO．1mRNA和HO．1蛋白的表达，肝 脏受缺血再灌注损伤后，肝组织中HO．1mRNA及HO．1蛋白均有明显的高 表达，且呈上升趋势，提示HO．1与HIRI的发生和发展有一定关系