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ELISA产品简析与探讨 公司技术服务中心 2011.08 一. ELISA的发展背景与原理简析 什么是ELISA？ ELISA——酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay） 发展历程和应用？ 起源于20世纪60年代：EIH（酶免组织化学技术，1966）→EIA（酶免疫测定，1971） →McAb技术（单克隆抗体，1975） →基于ELISA技术的快速检测产品（传染病，妊娠诊断，植物疫病，农兽残等） 农兽残小分子药物ELISA检测试剂盒技术原理？ 直接竞争法：“抢凳子”理论 二. 术语 抗体？为何能测定小分子？ 抗体（Antibody），又称免疫球蛋白（Immunoglobin，Ig），是一种免疫系统中鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质。仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。（“钥匙与锁的关系”） 以克伦特罗试剂盒为例： 包被板：包被有以半抗原（克伦特罗）经过偶联后免疫所获得的多克隆抗体；该抗体可以识别克伦特罗或者其类似物 单克隆抗体技术和多克隆抗体技术比较分析： 特别说明： 不同的技术平台上应用的原料虽然名称一致（比如克伦特罗的酶标和金标抗原抗体原料），但抗体的来源属性可能是不一样的。 某抗体适合做酶标产品，但是可能不适合做金标产品。 检测（下）限和灵敏度 试剂盒灵敏度： 试剂盒本身的灵敏度和对某一具体样本的检测限是不一样的。试剂盒本身的灵敏度一般是指试剂盒标准品中除零标准外浓度最小的标准品浓度值。 其理论定义为：测定10孔B0吸光度值，算出平均值X和标准偏差（SD），计算出3倍SD值，据公式X+3SD（ X+3SD ）得出的结果即为试剂盒灵敏度（一般招投标资料上要求的灵敏度即指标准曲线浓度最小值） 针对样本的检测（下）限： 其理论定义为：按照合理的前处理方法对20个阴性样本进行测定，算 出平均检测值X和标准偏差（SD），计算出3倍SD值，据公式X+3SD得出的结果即为该样本的检测（下）限。 试剂盒灵敏度和检测（下）限与曲线的关系： 1. IC50是什么？ 以竞争法为例：～系指 在酶免反应中药物产生 50%抑制率时所对应 的药物（标准品）浓度. 2.灵敏度怎么表示比较 好？ 用IC50值表示（使用 标准曲线浓度最低点表 示缺少统一标准且混乱） 3.灵敏度和检测(下)限 的关系? 一般地，灵敏度越高， 检测限也就越高。在设定 判断阈值（判断阴性阳性 值）时，阈值应可能落在 曲线斜率较大处（即形状 较陡处；靠近IC50值） 特异性（交叉反应率） 药物的交叉反应率： 定义： 引起50%抑制的标准物浓度与类似物引起50%抑制的浓度值之比。 比如客户问：克伦特罗试剂盒/检测卡对莱克多巴胺有没有交叉（能不能测）? 计算公式：～=IC50CL/IC50Rac※100% 意义： 类似物的交叉反应率参数体现试剂盒特异性。 试剂盒检测限： 1.检测限的意义：对某一具体药物和具体样本来说，并非试剂盒的灵敏度越 高越好，理想的状态是检测范围的中间值与该药物在某一样本的“超标值”或 “阳性值”接近，既可以减少误差又方便客户使用（即阈值和IC50接近） 2.样本差异性：结合样品前处理的实际情况，由于方法局限或者杂质因素干扰时需具体分析。比如，某一试剂盒本身最低检测限为0.05ppb,而对尿样的检测限可能是0.15ppb,牛奶为0.15ppb,虾产品为0.25ppb,饲料为15ppb。 3. 方法差异性：不同方法检测限也可能不一样（方法检出限），不同厂家的试剂盒检测限也可能不一样。 以克伦特罗试剂盒为例： 假阳性： 非目标成分在酶联吸附体系中的的总和。 假阴性： 在方法符合实际的情况下，对目标成分未产生响应或者响应不明显。 试剂盒可以允许一定程度的假阳性，但是不允许假阴性的存在。 举例： 双汇集团技术中心 质控标准要求： 克伦特罗ELISA试剂盒：假阴性率0% 假阳性率0% 克伦特罗金标试纸条： 假阴性率0% 假阳性率3% 补充资料《如何区分瘦肉精检测卡好坏》: /newsinfo.asp?id=54newsort=2 三. 不同反应原理ELISA试剂盒的特点比较 直接竞争法试剂盒特点： 1.原理简单：抗原抗体反应一步法，时间短； 2. 试剂构成简单；3个核心组分（见右图） 显色剂采用国外必威体育精装版技术，代替国内的A/ B液，同时提高对HRP的灵敏度和稳定性； 3. 加样步骤少且加样模式较统一，操作简 单且：50ul样本+100ul酶标物+100