化学法反应显示DNA201603-交大生命学院要点解析.pdf

实验三 Feulgen 反应显示DNA 上海交大生命学院 一、学习目的 1. 了解DNA 染色的多种方法、原理和应用。 2. 掌握Feulgen 反应的原理及操作步骤。 3. 观察细胞中DNA 的分布，巩固所学的理论 知识。 4. 了解实验中设计对照组的重要性。 三、实验仪器耗材与试剂 每人： 复式双筒显微镜 （带油镜 ）、Motic 数码互动系统 每组 常备：擦镜纸/ 盖玻片；载玻片/ 镊子；记号笔；小片滤纸；移液器/ 吸头； 香柏油/ 二甲苯； （如缺少可至准备处补充 ） 实验材料：四膜虫培养液 （200μl）； 试剂：Carnoy 固定液； Schiff 试剂 （铝箔包装 ）； 1mol/L HCl ； 自来水; 亮绿 整个实验班 恒温水浴锅两台 （60℃），恒温培养箱一台 （30℃） 四、实验内容  细胞化学一般实验流程介绍 Feulgen 染色  镜检观察，上传图片 细胞化学一般实验流程 使用石蜡 取材 老化 脱蜡 切片机 固定 切片 复水 组织切片 实验流程 冲洗 包埋 染色 脱水 透明 透明 镜检 常见实 取 制 干 固 染 复 脱 透 封 镜 验流程 材 片 燥 定 色 染 水 明 片 检 取材 针对不同实验方法和目的选取材料，一般应采用新 鲜组织切片或细胞，保证细胞内成分的新鲜可靠。 针对不同实验材料和目的可采用涂片、滴片、压片 制片 等方法。 滴片法 涂片法 压片法 • 一般用于染色体 • 使用棉签、牙签 • 对于根尖等特定 制片，需悬空滴 或其他工具将玻 部位细胞，需用 片保证细胞分散。 片上的细胞悬液 刀片切后压片使 涂布开。 细胞分散。 如细胞悬液制片一般应彻底干燥后才能进行固定染 干燥 色环节，否则标本片上细胞会大量脱落。 固定 定义：将新鲜的活组织/细胞取下后，立即投入固定剂中，借助 化学药品的作用，使细胞保持原有形态结构的一种手段。 物理方法固定： 血膜空气干燥、冷冻干燥或直接冰冻切片。 化学方法固定： 甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和锇酸等试剂。可采用蒸汽 或液体固定。 不同化学试剂所保存的成分，对活性的影响、保存程度的细腻 度等各不相同，显示多糖常用乙醇固定，显示酶类多用甲醛丙 酮固定。 Feulgen反应固定剂以OsO4和Carnoy效果较好， OsO4(1%或0.5%)最理想，但价钱较贵，故一般多采 用Carnoy固定液。 染色 • 借助物理或化学的方法对细胞内部结构进行染色能够增强对象 和背景的区别，可进行定性或定量的观察。 复染 • 在染色后用其他染液对细胞进行复染，使细胞结构清晰，且应 与有色沉淀有明显的对比，便于观察。 脱水 • 去除组织或细胞内的水分，一般采用浓度递增的酒精。如 标本已经含酒精的固定液固定，则只可直接用95%酒精。