z植物生理学试验.ppt

4、切割材料和接种 剪刀、镊子等金属器具，在酒精灯火焰上灼烧灭菌，等冷却后，将材料分割成小段或小块接种。茎段和花瓣分成0.5-0.8厘米，叶片切成0.5×0.5cm2的小块。每瓶接种4-5个外植体；每皿接种8-10个外植体。每接种一瓶或一皿材料将剪刀、镊子灼烧一遍，以防交叉污染。接种后，瓶口在火焰上旋转一圈，稍停一会用封口瓶膜封口，并用牛皮筋扎紧。 5、在培养器皿外壁上，用记号笔标记培养基编号、材料名称和接种日期。 6、培养、观察培养物的生长现象。 7、统计实验结果，并填写实验报告册。 [注意事项] 1、接种时，手和衣袖与酒精灯火焰保持适当的距离，以免烧伤。 2、接种时严格按无菌操作程序进行。 [思考题] 为什么选用两种消毒剂对材料进行消毒？ 接种时要注意哪些环节才能保证材料的消毒即彻底又不伤害材料的生活力？ 实验17 模式植物拟南芥的栽培与突变体表性分析 [实验原理] 拟南芥是重要的植物生理及分子生物学的模式植物。植物生理学的许多新知识、新理论都是用它的野生型及其突变体做对比研究获得的，如花发育的ABA模型，因此学会其栽培和突变体表性分析对揭示植物生命活动的规律有重要的意义。 [仪器与用品] 光照培养室、超静工作台、冰箱、高压灭菌锅。培养皿、20目筛、营养土、草炭土、蛭石、小塑料盆、塑料托盘、移液器（200ul,1000ul）干湿度计。 材料：拟南芥C型野生型和sos1、sos2、sos3 突变体。 [方法与步骤] 1、配制MS固体培养基：设置4个NaCl浓度即：0、50、100、200mM各250ml/小组，MS0多配制100ml/小组.培养基灭菌后倒平板 。 2、WT,sos1，sos2，sos3 的种子，经常规消毒灭菌后，播种到MS0平板上。 3、播有种子的平板置于4℃冰箱中低温处理2-3天。 4、平板转移到25℃光照培养室培养到7天，光强120-140 umol/cm2.s. 5、将一部分苗转移到含NaCl梯度浓度的平板上；平板上小苗摆成两排，上面为对照，下面为突变体。平皿竖插到特制的培养架上培养。 6、另一部分小苗转移到土壤中栽培。把营养土、草炭土、蛭石按1：1：1的比例混匀，过筛，并转入小塑料盆中，把小盆整齐摆放在塑料盘中，从盘底注入水，将土壤浸透后移栽小苗。小苗从培养皿中取出并在清水中洗净根部的培养基，每小盆移栽4-5颗小苗，小苗基部用手按实，使之与土壤密切接触。 7、观察表型：平皿中培养的小苗0.5-1个月后观察结果.土壤中的小苗培养2-3周后，每个材料浇灌4个NaCl浓度的水，每盆浇灌25ml，供浇3次每次相隔一周。 8、记录观察结果并统计数据，写成实验报告。 [思考题] 播种后的拟南芥为何要在4℃冰箱低温处理2-3天？ 比较野生型和sos1、sos2、sos3突变体在含盐的平板和浇灌系列梯度的盐溶液后的表型差异，并分析为什么？ 实验12 种子活力的快速测定 Ⅰ 氯化三苯基四氮唑法(TTC法) 实验原理 凡有生命活力的种子胚问呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生命活力的种胚则无此反应。当TTC渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶上的氢还原时，便由无色TTC变为红色的三苯基甲Ｘ（ TTＦ） 仪器与用品 １、实验仪器　恒温箱，烧杯，培养皿，镊子，刀片、天平２、实验试剂 0.5%TTC溶液３、实验材料 种子 方法与步骤 1、浸种 将待测种子于30-35℃温水中浸种，以增强种胚的呼吸强度，使显色迅速。 2、显色 取吸胀种子200粒，纵切为两半，将其中一半置于2只培养皿中（每皿100粒），另一半沸水煮5min杀死胚，加入适量的TTC，30 ℃保温0.5-1h。 3、观察结果，计算活种子的百分率。 Ⅱ溴麝香草酚蓝法（BTB法） 实验原理 凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中O2，放出CO2。 CO2溶于水成为H2 CO2 ，解离成H+和HCO-，使得种胚周围环境的酸度增加，可用溴麝香草酚蓝法来测定酸度的改变。BTB的变色范围为pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色。色泽差异显著，易于观察。 仪器与用品 1、实验仪器 恒温箱，天平，培养皿，烧杯， 镊子，漏斗，滤纸，琼脂 2、实验试剂 0.1%BTB溶液，1%BTB琼脂凝胶 3、实验材料 种子 方法与步骤 1、浸种 同TTC法 2、显色 取吸胀种子200粒，埋于备好的琼脂凝 胶培养皿中（间隔至少1cm）。置于30-35℃ 下培养2-4h，观察种胚周围的颜色。用沸水 杀死的种子作对照。 3、算活种子的百分率。 Ⅲ 红墨水染色法 实验原理 凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的能力，而死的种胚细胞原生质膜丧失这种能力，