完整的一次性单克隆抗体的生产工艺：个案研究_30213.pdf

GE Healthcare 完整的一次性单克隆抗体的生产工艺：个案研究 Jakob Liderfelt, Janne Simola, Annika Forss, Gustav Rodrigo, Karin Torstensson, Tomas Björkman, Kjell Eriksson, Hans J Johansson, and Andreas Muranyi GE Healthcare Bio-Sciences AB, RD, Björkgatan 30, SE-751 84 Uppsala, Sweden 介绍 本研究描述了中试规模的单克隆抗体生产工艺。该工艺是基于灵活的RTP一次性的生产技术。上游工艺采 用一次性WAVE生物反应器技术。在下游工艺中，使用预装填的RTP工业层析柱和含有一次性流路的 AKTAready层析系统。使用预冲洗消毒的中空纤维膜以及一次性切向流过滤系统进行浓缩。用于下游工艺 的起始原料为含超过10%抗体聚集体的单克隆抗体（MAb）料液。 尽管起始培养料成分复杂，但是可以使用耐碱的Mabselect SuRe亲和填料和多模式阴离子交换填料Capto Adhere进行两步层析纯化工艺，超过80%下游收率的同时得到高纯度单抗。 材料和方法 在WAVE BIOREACTOR™ 中进行细胞培养，培养体积为100L。通过离心分离以及过滤去除颗粒获得含有单克 隆抗体（MAb）的澄清的细胞培养上清。 该工艺过程开发采用HTPD高通量方法，使用PreDictor™孔板，该孔板或采用全自动化机器人系统Freedom Evo® 200 （Tecan ），或采用多道排枪、真空泵以及振动混合器组成的手动装置。通过使用HiScreen小型 预装柱进行优化实验和工艺稳健性验证研究，HiTrap™柱、HiScreen™柱和ÄKTAexplorer™系统均用于小规 模工艺开发中。 使用作为工业层析系统的ÄKTAready™ 以及ReadyToProcess™预装工业层析柱进行工艺放大。切向流过滤设 计使用ReadyCircuit™的一次性组件搭建，装配有一次性压力传感器、蠕动泵、ReadyMate™一次性无菌连 接器和中空纤维超滤膜，用于切向流的ReadyToProcess™中空纤维膜预先经过冲洗和伽马照射。 使用两根串联的3mLSuperdexTM 200分析柱，采用体积排阻层析法（SEC ）进行聚集体分析。采用商品化酶 联免疫试剂盒测定蛋白A和寄主细胞蛋白质（HCP）。 过程开发工作流程 过程设计 细胞培养 细胞培养： Wave BIOREACTOR™ WAVE BIOREACTOR TM 澄清： 离心分离和ULTA™ Cap HC 层析粗纯： MabSelect SuRe™ 预装工业层析柱 切向流过滤置换buffer： ReadyToProcess™中空纤维超滤膜 层析精纯： Screening PreDictor™ Capto™ adhere预装工业层析柱 96 孔板高通量开发