食用菌的遗传与育种.ppt

二、紫外线灭菌 概念 利用电子射过水银气体 产生的紫外线而杀菌的方法 杀菌机理 直接：使蛋白质、酶等变性失活间接：空气中产生臭氧或过氧化氢 使用 有效距离：1.5~2.0m理想波长：265nm 30w紫外灯照30min→避光30min 便携式 透力很弱定期更换灯管只起辅助作用伤眼睛和皮肤 特点 第二节 化学消毒灭菌法 概念与划分一、气雾消毒灭菌法 二、液体消毒灭菌法 一、气雾消毒灭菌法 （一）要求 密闭条件下保持一定时间 （二）种类 甲醛 气雾盒 机理：结合蛋白质氨基， 使其变性 。 喷：5%熏：10ml/m3+1/2KMnO4 用法 甲醛 有刺激性和腐蚀性 气雾消毒盒 粉末状 刺激性小 扩散力及渗透性强 特点 2~6g/m3→点燃（ 熏30min以上） 用法 二、液体消毒法 固体或液体药品 水 药液（多现配现用） 概念 种类 氧化剂 熟石灰 表面活性剂 乙醇酚类新洁尔灭 （一）氧化剂 高锰酸钾  紫色针状结晶 0.1%~0.2%浸泡手、器具等。 ? 过氧化氢 无色液体，属环保型消毒剂3%皮肤、伤口消毒 6％浸泡器皿30min 漂白粉 2%~5%浓度洗刷、喷雾、浸泡湿处可干撒 作用约30min 使用 注意 原品密封随配随用对衣物有退色和腐蚀性 过氧乙酸无色至微黄色液体，有刺激性、腐蚀性、挥发性。 1.5%熏蒸7ml/m3 0.2%洗手 0.5%浸泡 0.5%喷雾 使用 （二）表面活性剂 脱水剂脂溶剂蛋白质变性剂 乙醇 70％~75％效果最好 皮肤、器皿擦拭或浸泡 浓度 高浓度效果差 无水的无杀菌作用 3.新洁尔灭 0.25%消毒皮肤、浸泡器具0.5%喷雾 酚类 石炭酸：3%~5%浸泡或喷雾 来苏尔 刺激性小效力比苯酚强4倍3%~5%喷雾、擦洗2%消毒手 （三）熟石灰 提高pH、消毒 破坏秸草表面的蜡质 提供钙素养料 作用 使用 1%~2％拌料5%~10％喷、浸、刷、喷干撒湿环境或霉染处 药品及浓度的选择依据 微生物特点物品的性质消毒目的环境影响 标准 性质稳定易溶于水杀菌力强抗菌谱广作用较快使用浓度低价格低廉没有毒腐性或很小 内容小结 一、物理消毒灭菌法 1.热力 灭菌 干热（酒精灯、干燥箱） 高压(排净冷空气）常压（攻头、控中、保尾） 湿热 2.紫外线（使用方法、注意事项） 二、化学消毒灭菌法 常用 酒精、甲醛、高锰酸钾来苏、新洁尔灭等 渗透压稳定剂 无机盐、糖类和糖醇类都可作为渗透压稳定剂，常用浓度为0.4-1.2mol/L。几丁质是细胞壁的主要成分，故几丁质酶的作用比-葡聚糖酶更为重要。几种常用无机盐渗透压稳定剂系统中，几丁质酶活性的顺序为：NO3-,Cl-SO42-PO43-和Na+,K+Ca2+,Mg2+.。即单价阴离子和单价阳离子能提高几丁质酶的活性，2价和3价离子都明显抑制几丁质酶的活性。 原生质体融合 PEG诱导融合 是目前进行原生质体融合的主要方法。具体操作步骤如下： 用0.6-0.7mol/L甘露糖醇将纯化的原生质体制成浓度为106/mL悬浮液 将两亲本的原生质按1:1混合 取1mL混合液与1mL50%PEG（相对分子量为4000-6000）混匀 28-30℃下静置30 min 加2 mL PH 9-10甘氨酸缓冲液（含100mmol/LCaCl2） 稀释 充分混匀后在28-30℃下静置20 min 1000r/min离心5 min，小心弃去上清液 沉淀物用再生培养基洗涤2次 最后用再生培养基调成104-105/mL的浓度进行培养。 电融合 主要由两个步骤构成：首先是施加低强度非均匀交流电场，使细胞膜发生极化形成偶极子，之后向高强度方向运动，整个过程叫双向电泳。然后施加直流脉冲，诱导细胞的融合。 原生质体再生 是指原生质体重新长出细胞壁，再经细胞分裂回复到菌丝状态的复杂过程。但由于原生质体本身的生理状况及再生培养条件等一系列内外因素，都可能产生大量无核的失去再生能力的亚原生质体，有时亚原生质体比例甚至高达50%以上。再生培养基的成分对原生质体影响较大，据报道，改善再生条件，可提高再生频率。 两个不同亲本的原生质体融合后，会形成同源融合子、异源融合子以及大量未经融合的亲本原生质体，如何从这一庞大的混合群体中准确、迅速选出异源融合子，对融合亲本进行标记是选择和鉴定异源融合子的必要手段。有营养缺陷标记、抗药性标记、荧光染色标记、灭活标记、同工酶标记、RFLP标记及RAPD标记等方法。 亲本的标记 融合子的鉴