生产菌种的制备与保藏.ppt

2、菌种复壮 使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性。 复壮措施： 对已衰退菌种配合一定培养条件进行单细胞分离纯化 淘汰衰退的个体 选择合适的培养基 思考题 1、名词解释 多因素低剂量的诱变效应、互变异构效应、染色体畸变、基因突变、表型延迟、营养缺陷型、杂交育种、原生质体融合、原生质体再生、菌种的扩培、接种量、菌种退化、菌种复壮 2、采集土壤微生物样品时应该注意哪些问题？ 3、什么是增殖培养？为什么要进行增殖培养？ 4、土壤中分离纯化微生物的方法有哪些？请简述之。 5、什么是微生物的初筛？请例举两种初筛方法，并简述之。 6、菌种保藏的原理是什么？常见的军种保藏方法有哪些？ 7、菌种退化的原因有哪些？简述防止菌种退化的措施。 8、常见的菌种复壮措施有哪些？ 第9章 酒精发酵与酿酒（8学时） 第6章 有机酸发酵及其发酵食品（4学时） 第8章 发酵豆制品（6学时） 第9章 其它发酵食品(2学时） 在生产中从以下几个方面判定 同菌种或同一菌种工艺条件不同，种龄是不一样的，一般需经过多种实验来确定，嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶，l2 h 最好 通常接种量，细菌 l% ～ 5% ，酵母菌 5% ～ 10% ，霉菌 7% ～ 15% ，有时 20% ～ 25% 。 种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。因此，首先必须保证生产菌种的稳定性，其次是提供种子培养的适宜环境，保证无杂菌侵入，以获得优良种子。因此，在生产过程中通常进行以下两项检查。 菌种保藏的原因：在生产和培养过程中，菌种会衰退，纯度也会下降。 菌种保藏的要求：提高菌种的存活率，减少菌种的变异，尽量使菌种保持原有的优良生产性状。 不同的菌种的保藏方法是有差异的：酵母菌—斜面低温保藏法，曲霉菌—（如用低温斜面法则易变异）砂土管保藏法，放线菌及产孢子的细菌—砂土管法，细菌—冷冻干燥法。 目前工业规模的发酵罐容积已达到几十立方米或几百立方米。如按百分之十左右的种子量计算，就要投入几立方米或几十立方米的种子。要从保藏在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由实验室制备到车间生产的过程。其生产方法与条件随不同的生产品种和菌种种类而异。如细菌、酵母菌、放线菌或霉菌生长的快慢；产孢子能力的大小；及对营养、温度、需氧等条件的要求均有所不同。因此，种子扩大培养应根据菌种的生理特性，选择合适的培养条件来获得代谢旺盛、数量足够的种子。这种种子接入发酵罐后，将使发酵生产周期缩短，设备利用率提高。种子液质量的优劣对发酵生产起着关键性的作用。 生产啤酒的酵母菌一般保存在麦芽汁琼脂或MYPG培养基（培养基配制：3克麦芽浸出物，3克酵母浸出物，5克蛋白胨，10克葡萄糖和20克琼脂与升水中）的斜面上，于4℃冰箱内保藏。每年移种3-4次。将保存的酵母菌种接入含10ml麦芽汁的500-1000ml三角瓶中，再于25℃培养2-3天后，再扩大至含有250-500ml麦芽汁的500-1000ml三角瓶中，再于25℃培养2天后，移种至含有5-10L麦芽汁的卡氏培养罐中，于15-20℃培养3-5天即可作100L麦芽汁的发酵罐种子。从三角瓶到卡氏培养罐培养期间，均需定时摇动或通气，使酵母菌液与空气接触，以有利与酵母菌的增殖。 厌氧培养 anaerobic culture 指把微生物置于与分子态氧隔绝状态下所进行的培养。专性厌氧细菌不这样培养就不能生长发育，但在实验条件下，有时也把兼性厌氧细菌也进行这样培养。由于目的不同而有种种培养方法，可分为以下几大类： 　　（1）与空气隔绝或尽量少接触空气的培养法：在三角瓶瓶颈以下装满液体培养基，通过煮沸把溶解的空气赶出后，立即冷却进行细菌接种。由于发酵而产生H2和CO2时，就可进一步确认是厌氧细菌。另外，把琼脂培养基加入普通试管约10厘米高度进行穿刺培养，或移植于液体培养基和固体斜面培养基上以后，再加一层液体石腊或矿物油，用这些方法可防止与空气接触。（2）除掉空气的方法：把微生物装入耐压容器中进行真空培养，或充满二氧化碳、氢气、氮气、氩气等。这些气体可把事先混入的微量氧气除掉。在氢存在时，可用置换后飞溅火花等方法来除掉残存的氧气（3）去氧的方法：使用碱性邻苯 三酚（pyrogallol） 、黄磷、金属铬和稀硫酸进行化学除氧，或使用好氧细菌及发芽的种子，使通过呼吸而消耗掉氧气。（4）在培养基中加入还原剂（如0.1%的巯基乙酸钠盐，0.01%的硫化钠等）。以上各种方法进行适当组合就能进一步确认厌氧细菌。为了确定厌氧性，可在碱性条件下加入葡萄糖并加热，与配制的还原型次甲蓝（美蓝）溶液一起加入，保持脱色状态即可。 并种：将几个摇瓶、茄子瓶、种子罐等的种子合并做为下一级培养的种子。倒种：用发酵液做为发酵罐、种子罐的种子。 生产过程中经常出现种子质量