生工植物细胞工程基本设备及操作技术.ppt

试管苗的形成 移栽 经过炼苗的小苗，可以和一般植物一样进行大规模栽培 基本培养基贮备液（母液）的配制和保存 母液（贮备液）：根据实验需要将基本培养基试剂分类按一定浓度比例配制成的浓缩液。 以MS培养基的配制为例，将MS培养基中除蔗糖外的19种成份分成5大类，分别为大量元素（MSⅠ）5种、微量元素（MSⅡ）7种 、铁盐（MSⅢ）2种 、有机物（MSⅣ）4种 、肌醇（MSⅤ）1种 MSⅠ(大量元素) 培养基浓度(mg/L) 扩大20X称量（mg/L） 母液浓度（mg/L） 1.NH4NO3 1650 33000 33000 2.KNO3 1900 38000 38000 3.CaCl2·2H2O 440 8800 8800 4.MgSO4 ·7H2O 370 7400 7400 5.KH2PO4 170 3400 3400 将1、2、4、5称好放入烧杯甲溶解，将3放入烧杯乙溶解，再混合定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用 标签：MSⅠ大量元素 50mL/L 2012，9，9 500mL 甲 1、2、4、5 500mL 乙 3 ＋ 混合定容 贴标签 1L MSⅡ (微量元素) 培养基浓度(mg/L) 扩大倍数200X（mg） 母液浓度(mg/L) 1.KI 0.83 166 166 2.H3BO4 6.2 1240 1240 3.MnSO4·4H2O 22.3 4460 4460 4.ZnSO4·7H2O 8.6 1720 1720 5.Na2MoO4·2H2O 0.25 50 50 6.CuSO4·5H2O 0.025 5 5 7.CoCl2·6H2O 0.025 5 5 将1～7称好放入烧杯溶解，定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用 标签：MSⅡ微量元素 5mL/L 2012，9，9 1000mL 1～7 混合定容 贴标签 1L MSⅢ (微量元素铁盐) 培养基浓度(mg/L) 扩大倍数200X（mg） 母液浓度(mg/L) 1.FeSO4·7H2O 27.8 5560 5560 2.Na2·EDTA·2H2O 37.3 7460 7460 将1称好放入烧杯甲溶解，将2放入烧杯乙溶解，再混合定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用 标签：MSⅢ铁盐 5mL/L 2012，9，9 1L 500mL 甲 1 500mL 乙 2 ＋ 混合定容 贴标签 MSⅣ (有机物) 培养基浓度(mg/L) 扩大倍数200X（mg） 母液浓度(mg/L) 1.烟酸 0.5 100 100 2.盐酸吡哆醇 0.5 100 100 3.盐酸硫胺素 0.1 20 20 4.甘氨酸 2 400 400 将1、2、3、4称好放入烧杯溶解，混合定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用 标签：MSⅣ有机物 5mL/L 2012，9，9 1000mL 1～4 混合定容 贴标签 1L MSⅤ 培养基浓度(mg/L) 扩大倍数200X（mg） 母液浓度(mg/L) 1.肌醇 100 20000 20 将肌醇称好放入烧杯溶解定容到1L，放入试剂瓶贴标签，备用 标签：MSⅤ肌醇 5mL/L 2012，9，9 1000mL 1 溶解定容 贴标签 1L 母液 种类 浓缩倍数 取样体积 MSⅠ 大量元素（5种） 20X 50mL/L MSⅡ 微量元素（7种） 200X 5mL/L MSⅢ 铁盐（2种） 200X 5mL/L MSⅣ 有机物（4种） 200X 5mL/L MSⅤ 肌醇（1种） 200X 5mL/L 贮备液用量＝拟配培养基总体积×取样体积 母液配制目的：简化操作、保证精度、方便冷藏 计算每种母液的试剂用量 分别称取各种试剂 分别溶解 混合定容 母液装瓶 贴标签 低温保存 及时记录 基本培养基母液配置流程 MSⅠ大量元素母液20X 张三 2012.09.09 标签格式： 以MSⅠ大量元素为例 1、请阐述下列培养基（1L）具体的取样及配制方法 B5无机盐＋N6有机物＋KT0.1＋BA2＋IAA0.5＋CM10%+Ac 0.5%（基本培养基及激素母液均已准备） 2、植物组培培养基琼脂浓度为何在0.6%-1.0%，而微生物培养基琼脂浓度却高达1.5%-2.0%？ 3、固体培养基灭菌后不能凝固，可能的原因是什么？ 作业： 一、外植体的选择及消毒 二、外植体接种 三、培养、观察与处理 Sec3 外植体接种与培养 外植体：用于无菌培养的离体材料，泛指第一次接种所用的植物组织、器官等一切材料。 一、外植体的选择及消毒 1、植物的种类选择 选相对易于离体培养的种类、品种或类型 选生产上或研究上意义比较大的种类、品种或类型 材料来源是否充足 考虑品种及其区域化问题 2、外植体的季节、年龄和着生部位 一般处于生长季节春夏季取材灭菌容易，秋冬季难以成活