生化分析系统有效性.ppt

催化活性 （catalytic activity） 在特定测量系统中，特定化学反应转化被催化物质速率相关的组分特性 催化浓度 （catalytic concentration） 测定的是酶促反应初速度 零级反应 酶催化活性浓度测定特点 3、连续监测参数 4、校准和溯源 (ΔA/min) 样 U/L=———————— ×C标 (ΔA/min) 标 5.反应方向 反应方向分正向（Positive 或 Increase）和负向（Negative或Decrease）两种，吸光度增加者为正向反应，下降者为负向反应。 6.试剂量(Reagent volume) 样品量（Sample volume） 1μl起步 精确到0.1μl 试剂的剂型可以分为单试剂、双试剂，加试剂的过程则相应的有单试剂方式、双试剂方式。 目前生化分析仪大多采用双试剂分析，它可以提高试剂的稳定性和抗干扰性。 对于不同的机型，第一试剂量、第二试剂量、第三试剂量和总反应量有不同的取量范围，在设置取量参数时，应注意体积的上限和下限。 样品体积与反应液总体积的比值是方法学基本参数； 样品占总体积比例应在10％以下。含量低、吸光度低的被测吸光物质，样品用量较大； 而方法灵敏、吸光度高的实验方法，样品用量较小； 样品试剂比增大，样品内源性干扰增加，方法特异性会下降；比例减少，检测信号偏低，信噪比(噪音／信号)增大，精密度下降，偶然误差会增加。 样本/试剂用量及其比，应以试剂说明书为准，不宜轻易改动。 7. 反应时间（Reaction time） 计时时间（Read time） 反应时间:指分析仪一个检测周期的时间，一般小于10分钟。多数全自动生化分析仪可以连续监测整个反应周期。 计时时间:读取该时间段吸光度的变化，计算样本浓度。 终点法 动力学法 一级反应 延迟期 一级反应期 零级 延迟期 零级反应线性期 吸光度 A 时间 T 试剂空白界限 底物耗尽界限 动力学法测定反应进程曲线 8.底物消耗 在连续监测法测定酶活性或代谢物时，如果在监测期内吸光度上升或下降超过其底物耗尽值（〉5%)，则说明该样品酶活性或待测物的水平非常高，底物将被耗尽，监测期的吸光度将偏离线性，使测定结果不可靠。 应该设立底物耗尽参数,以发现高浓度样品. 该样品应稀释一定的倍数重新测定。 方法:不同仪器设计不同 延迟期吸光度差值 延迟期吸光度变化速度 反应初始吸光度与最后读点吸光度差值 9.测定线性范围 每种待测物分析都有一个可测定的浓度或活性范围，样品结果若超过此范围，分析仪将显示测定结果超过线性范围的提示。 10.试剂空白 11.校正 校正品 配套 测定结果有溯源性 两点校准 多点校准(特种蛋白分析) 严格按照厂家声明的校准方式校准 酶催化活力浓度测定要校正 注意校准的频率 其他分析技术 离子选择电极分析法(ISE) 1 原理 离子选择电极分析法（ion selective electrode，ISE）是利用电极电位和离子活度的关系来测定被测离子活度的一种电化学分析法。 电极电位与离子活度 Nernst 方程 2 ISE的特点 3.3 应用 选择性 共存离子的干扰小 线性范围 干扰 溶血、脂血及黄疸不影响测定 分析 速度快，易于自动化，标本用量少 玻璃膜电极 气敏电极 酶电极 pH 二氧化碳 葡萄糖 Na+ 乳酸 K+ 氯 Li+ Ca2+ iCa2+ 免疫比浊分析技术 分类： 散射免疫比浊分析法 （nephelometry） 透射免疫比浊分析法 （ turbidimetry） 竞争免疫浊度分析法 1. 散射免疫比浊分析法 基本原理：抗原抗体复合物对一定波长的光产生折射、偏转，偏转角度及散射光强度与复合物粒子的大小和量有关。 Rayleigh散射 Mile散射 Heidelb