生物素亲和素标记技术完整讲解.ppt

五 反应特点 1. BAS具有高灵敏度、高特异性、高稳定性和适用性等特点。 2.生物素易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合，再和生物素衍生物结合，将信号多级放大，能保持大分子物质的原有生物活性。 3.亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性，不增加非特异性干扰，也不会因反应试剂浓度高低受影响。 4.酸、碱、变性剂及有机溶剂均不会影响亲和素与生物素的结合力。裴仁军等试验结果表明，链霉亲和素与生物素能够在结合表面形成均一的多层膜维系紧密的结合。 5.BAS不仅能与酶、荧光素和放射性核素等各类标记技术结合，还可制成亲和介质，用于分离提纯。 6.BAS操作方便，反应结果可用肉眼观察，实验成本低。 六 应用前景 BAS具有诸多优点，主要应用于抗原、抗体、细胞等的定位和检测，能将形态、 定位研究与功能、代谢研究有机地结合在一起，此方法经不断改进日趋成熟，其相 关试剂盒也逐步商品化，在各个学科的应用已占有相当高的比例，科研工作中的各 种标记技术都是为了使信号不断地放大，BAS与其他标记技术联合应用更能成倍的 扩大目标信号，使检测结果更加精确，更有说服力，因此，BAS在其他领域的渗透 成为现阶段研究的重要课题，尚有更广阔的发展空间和应用前景。 总 结 一 背景 二 原理 三 实验方法及步骤(BAB ABC LAB) 四 应用 1 在免疫学中的应用 免疫荧光技术中的应用 免疫放射技术中的应用 胶体金技术中的应用 免疫酶技术中的应用 ELISA中的应用　 2　在分子生物学中的应用 3　在组织化学中的应用 4 在分离纯化中的应用（亲和层析） 五 反应特点 六 应用前景  谢谢大家！ 谢谢大家在生活中、学习中给予我的帮助！ ? 祝：郑老师工作顺利、生活美满！ 同学们学业有成、前程似锦！ 生物素-亲和素标记技术 第一组 一 背景 二 原理 三 实验方法及步骤 四 应用 五 反应特点 六 应用前景 一 背景 生物素： 又称维生素H 、辅酶R，是水溶性维生素，也属于维生素B族。 　 1936年，两位德国科学家Kogl和Tonnis从煮熟的鸭蛋黄中分离提取出一种结晶物质，是酵母生长所必需的，称之为“生物素”。生物素厂泛存在于自然界的各种生物中,是人类和动物维持健康不可缺少的要素，并因而得名。因其在食物中的分布很广，几乎每种食物中都含有少量的生物素，加之人体每日的所需量又很少,所以，人们一般都不缺乏这种维生素。 亲和素： 亲和素是一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD， 每个分子由4个亚基组成，可以和4个生物素分子亲密结合。 亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大， 两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的 结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。 因此把亲和素和生物素与ELISA偶联起来，就可大大提高ELISA的敏感度。 卵白亲合素 亲合素 链亲合素 卵黄亲合素 类亲合素等 后两种因其特异性亲合力低，研究不多，前两种目前已深入研究并得到广泛应用。 二 原理 20世纪60年代初发现了生物素(biontin，B)和卵白素(avidin，A)，其亲和力至少比抗原-抗体结合力高百万倍，是目前发现的自然界中具有最强亲和力的物质。