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实验室常见微生物 李继辉 第一章 肠杆菌科 • 一、大肠埃希菌 • 俗称大肠杆菌，属于埃希菌属。在婴儿出 生后数小时即进入肠道，并终身伴随。当 宿主免疫力下降或菌侵入肠外组织或器官 （如尿道）时，可引起肠外感染。某些特 殊菌种能导致腹泻。 • 常作为粪便污染的检测指标。 • 革兰氏染色阴性。 • 1、生物学特性 • 大小：0.4-0.7 ×1-3μm。周身鞭毛。兼性 厌氧。 • 2、鉴别检查 • 能发酵葡萄糖等多种糖类，产酸并产气。 • 吲哚、甲基红、VP、枸橼酸盐（IMVIC）试 验结果为“++--”。 • MUG(4-甲基伞形酮葡糖苷酸）：4-甲基伞 形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。 • 吲哚（靛基质）试验：指有些细菌如大肠 埃希菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲 哚 (靛基质)，经与试剂中的对二甲基氨基 苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，则 为吲哚试验阳性。 • 甲基红试验：细菌（如大肠埃希菌）发酵 葡萄糖产酸，使培养基PH下降至4.2或更低， 则为甲基红阳性。 • VP试验：由Voges和Proskauer两位学者创 建，故有此学名。 • 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分 解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧 成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被 空气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白 胨中的胍基生成红色化合物，称V －P （+） 反应。 大肠埃希菌v-p试验阴性。 • 枸橼酸盐利用试验：是以枸橼酸钠为唯一 碳源、PH值7.0的培养基上，产气杆菌分解 枸橼酸钠产生碳酸盐，使培养基由中性变 为碱性，培养基中指示剂溴麝香草酚蓝 (BTB)由浅绿色变为深蓝色，此为枸橼酸盐 利用试验阳性。大肠杆菌因不能利用枸橼 酸盐，此试验为阴性反应。 • 3、2015版药典： • 1）胰酪大豆胨液体培养基中，30〜35 ℃培养 18〜24小时； • 2）麦康凯液体培养基中，42〜44 ℃培养24〜 48小时； • 3）物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上， 30〜35 ℃培养18〜72小时。 • 结果判断：若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落 生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验， 确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基 平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定 结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。 二、沙门菌 • 沙门菌属是一类寄生在人类和动物肠道中， 生化反应和抗原结构相关的革兰氏阴性杆 菌。分为肠道沙门菌和邦戈沙门菌两个种。 • 1、生物学特性 • 大小0.6-1.0×2-4μm，多数周身鞭毛，一 般无荚膜，均无芽孢。 • 不发酵乳糖或蔗糖，对葡萄糖、麦芽糖和 甘露糖发酵，伤寒沙门菌不产气。 • 2、致病性：内毒素引起宿主体温升高，白 细胞数下降等；肠毒素引起的腹泻。 • 3、鉴别检查 • 三糖铁（TSI）琼脂试验： • 可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产 气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。 • 葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因 量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化， 加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱 性产物，故使斜面后来又变红，底部由于 是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍 保持黄色。 • 4、2015版药典 • 1）胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30〜 35℃培养18〜24小时。 • 2）RV沙门增菌液体培养基中，30〜35℃培 养18〜24小时。 • 3）取少量R V沙门菌增菌液体培养物划线 接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 平板上，30〜35℃ ：培养18〜48小时。 • 4）用接种针挑选疑似菌落于三糖铁琼脂培 养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种， 培养18〜24小时。或采用其他适宜方法进 一步鉴定。 • 结果判断：若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养 基平板上有疑似菌落生长，且三糖铁琼脂培养 基的斜面为红色、底层为黄色， • 或斜面黄色、底层黄色或黑色，应进一步进行 适宜的鉴定试验，确证是否为沙门菌。如果平 板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结 • 果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红 色