生命科学超微量样本检测和紫外检测技术-13.12.21详解.ppt

1、在实验界面打开时，在左边栏选择Dye/Chrom. Editor。 2、输入染料名称和特征，染料特征信息由染料制造商提供。软件允许检测波长在450到700nm的实验分析 3、在实验界面下拉菜单选择实验使用的染料（用红色圈起） 4、至多选择两种Dye/Chrom. Editor中的染料。如果只有一种在用染料，那么染料二选择无。 * 传统的检测细胞的死活率是用台盼蓝染色法，但要用试剂染色，要在显微镜下计数，非常麻烦。 Lauzanne Switzerland 实验室研发了这种高效的监视细胞生长的方法，通过用A280检测游离蛋白的含量来检测细胞的死活率； 无需任何试剂，减少实验误差。 图示：圆点黑色曲线是ND检测A280培养液中的蛋白含量；（但我还是不明白为什么蛋白还能先减少再增加） 方点灰色曲线是台盼蓝染色法检测细胞死活比的曲线？ 竖线之前的细胞还未进入凋亡期，在消耗培养液中的营养，所以蛋白含量会减少。 * * Developed for a customer * 浓度为0.0015 — 1.5 g/L（1000倍的跨度）的样品，仍能形成非常好的线性关系 Assay developed for customer in dye industry. Sample volume was no problem-customer prepared huge volumes of his dye. What they wanted to avoid was making dilutions which introduced error. * Abraxane to treat pancreatic, breast and lung cancers. Drug is bonded to albumin coated NP/ transports across the endothelium to deliver the drug Albumin-mediated transport of paclitaxel across the endothelium facilitates uptake of drug, and a degree of tumour selectivity is achieved by the albumin-binding propensity of SPARC (Secreted Protein Acidic Rich in Cysteine), a substance expressed on and around many breast * Nanoparticle characterization can be very complex requiring instruments such as Atomic Force Microscopy, Dynamic Light Scattering etc Similar data was collected for gold nanoparticles d=52 nm, SPR max 533nm Advantage: small sample volume; large concentration range * * 能同时激发多个荧光基团 * FOI标记效率 FOI(Frequency Of Incorporation) Cy3标记RNA的FOI=(OD550/0.15)*(324)/(OD260*40) Cy5标记RNA的FOI=(OD650/0.25)*(324)/(OD260*40) FOI20时,说明染料杂交效率高，染料十分匹配； 20FOI15时,说明染料杂交比推荐值低，但勉强可以用； FOI15时，说明染料可能不是合适的杂交染料，不建议使用 Cy3标记RNA的FOI=(OD550/0.15)*(324)/(OD260*40) =（0.232/0.15)*324/(0.119*40) =10520 可用 Cy5标记RNA的FOI=(OD650/0.25)*(324)/(OD260*40) =(0.002/0.25) *324/(0.119*40) =0.54415 不建议使用 二、用ND检测细胞死活率 P. Michel et al ; NanoDrop –based method for the rapid determination of viability decline in suspension cultures of animal cells, Analytical Biochemistry 430 (2012) 138-140 传