液相色谱仪日常维护及常见故障教案分析.ppt

一、液相色谱仪日常维护及注意事项 1 流动相 2 脱气机（在线） 3 泵（单元、二元、四元） 4 进样器（手动、自动） 5色谱柱 6 检测器(VWD/DAD/FLD/RID…) 溶剂截止波长 选择合适的滤膜 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜：适用于水基溶剂，不适用于有机溶剂，推荐用于蛋白质和其相关的样品。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸、70%乙醇、二氯甲烷、不适用于DMF二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：具有蛋白质吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂。 注意：1，每张滤膜只能用一次。 2，水相和有机相不要搞混。 柱塞清洗附件Seal Wash HPLC使用缓冲溶液Buffer时，由于缓冲盐溶液存在高压盐析现象，析出的细小盐粒会损伤蓝宝石柱塞杆和密封垫，从而造成漏液等故障现象，因而建议选配柱塞清洗附件Seal Wash。 缓冲盐浓度大于0.01mol时，强烈建议选配在线的柱塞清洗附件Seal Wash。 清洗液配置：90%水+10%异丙醇溶液，流速为2-3滴/min。该混合液可抑制菌类生长和降低水的表面张力。清洗液虹吸流出，不能干涸。 在线真空脱气机 为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml的异丙醇。 1，新的脱气机或新的管路； 2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间的互换时； 3，输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物。 4，完成上述操作后，打开清洗阀，用大流量冲洗，5ml/min。 3 泵 泵的注意事项 1，溶剂的过滤、脱气； 2，避免使用腐蚀性溶剂； 3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速—较低的系统压力。 4，更换过滤白头； 5，考虑溶剂的相容性； 6，尽可能使用新鲜的水； 7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。 8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，在0—200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。 四元泵： 四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在下面通道，以避免盐颗粒析出。 二元泵： 设置压缩因子补偿，以达到最佳比例效果。 手动进样器 样品要干净、经过过滤。 合适的进样体积，比如定量环为20ul，进样体积应为0—10ul，或者20ul，进样20ul时注射样品量应至少60ul以上。 定期清洗进样阀，清洗过程如下： 1，将进样阀旋至Inject位置； 2，用带有专用头的注射器用纯水约20—30ml冲洗进样阀； 3，将进样阀旋至Load位置。 参考左图。 自动进样器 样品要干净、经过过滤。 洗针：把样品残留降低到最小限度，可降低进样的记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。 多次吸液用于进样量大于100ul 色谱柱的再生 进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。 色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积 125-4 1.6ml 30ml 250-4 3.2ml 60ml 250-10 -20ml 400ml 请根据下表选择您的再生方法： 极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生： 正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水** 非极性固定相（如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等）的再生： 水→乙腈→氯仿（或异丙醇）→乙腈→水 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱 注意： 在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 **如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。 6 检测器 VWD的光源—氘灯有一定的半衰期，一般为1000小时左右，所以在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命。 流动池污染后，会造成灵敏度下降、噪声加大，应避免脏的样品进入流动池。定期使用异丙醇冲洗系统对保持流动池性能有一定好处。 更换氘灯。 二、液相色谱仪故障分析 能引起HPLC发生问题的潜在因素: 工作环境 电源及地线 流动相 泵 进样器 保护柱 在线过滤器 连接管路 色谱柱 检测器 数据处理装置 操作 液相色谱仪器出现故障可以从多方面入手 1.从部件的运转情况推测，如压力、流速的变化 2.从色谱图的异常情况推测，如出峰时间、峰形 3.从数据结果中分析 典型故障分析及实例基线噪声 流动相内含有空气 - 脱气处理 检测池内有气泡 - 冲洗检测池或在检测池出口