免疫学检测详解.ppt

一、认识、阐明相关疾病发病机制 白细胞中性粒细胞趋化作用 障碍 中 性 粒 细 胞 的 渗 出 过 程 A B C 毛细血管内皮细胞 侵入细菌 附壁 粘着 游出 EC EC 二、诊断、辅助诊断相关疾病 （一）用已知抗体检测未知抗原 检测病原体及其抗原组分 肿瘤抗原的定性、分型、定量与定位 HLA分型、红细胞血型抗原 （二）用已知抗原检测未知抗体 病原特异性抗体 变应原抗体 自身抗体 细胞毒抗体 三、免疫功能检测与监视 体液免疫功能：免疫球蛋白、B细胞数量与功能. 细胞免疫功能：T细胞总数与亚群 、T细胞功能 ①非特异性增殖反应： ②对特异性抗原的T细胞增殖反应 ③细胞介导的细胞毒试验 ④测定T细胞产生的细胞因子 细胞因子（及其受体）和黏附分子水平 非特异性免疫功能 免疫学检测技术不仅用于疾病的诊断与辅助诊断，也可以通过机体免疫功能检测与监视了解疾病的病程变化、观察疗效、判断预后。 基本特点 特异性和交叉反应 可逆性 可见性与带现象 反应的阶段性 抗原抗体检测的原理与基本特点 可见性与带现象 抗原抗体结合出现可见反应具有一定的量比关系，当两 者分子比例合适时，抗体分子的两个Fab段分别与两个 抗原决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体，形成 肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物） 前带现象（prozone）:抗体过剩 后带现象(postzone) :抗原过剩 （二） 影响抗原抗体反应体系的因素 适宜的抗原抗体浓度和比例 反应时间 电解质 温度 酸碱度 （三）抗原、抗体检测的方法 沉淀反应 凝集反应 补体参与抗原抗体反应 免疫标记技术 蛋白质芯片技术 1. 沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体在有适量电解质存在下，出现肉眼可见的沉淀现象，称为沉淀反应。 该反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散，即可溶性抗原 与抗体在凝胶中扩散，在比 例合适处相遇形成可见的白 色沉淀现象。 （1）单向免疫扩散 Ab 待测血清（Ag） 不同浓度的标准血清 浓度 直径 （对数） d’ c’ d’ 将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制成琼脂板，在适当位置打孔并加入抗原。抗原抗体复合物体积增加到一定程度时停止扩散，出现以小孔为中心的圆形沉淀圈，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量呈正比。取已知量抗原绘制标准曲线，可根据所形成沉淀环的直径，从标准曲线中查出待检标本的抗原含量。 火箭电泳 （2）双向免疫扩散 Ag Ab 将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，抗原抗体会自由地向四周扩散，在它们相遇的位置形成一条沉淀线。是一种定性检测法。 Ag1 Ag1 Ab1 Ag1 Ag2 Ab1、2 Ag1 Ab1、2 Ag1、 2 （3）免疫电泳 （4）免疫比浊 待测Ag Ab槽 已知Ag + - Ag2 Ag3 Ag1 Ag’ 根据不同量抗原抗体反应所形成的浊度不同判断样品中未抗原的含量。 2. 凝集反应 直接凝集 间接凝集 （1）直接凝集 红细胞 抗红细胞抗体（IgG） + 凝集 用于：ABO血型测定 细菌鉴定（肥达试验） （2）间接凝集 激素抗体 激素分子 不凝集 + 激素抗体 激素包被的乳胶颗粒 + 凝集 常用载体：绵羊红细胞、聚苯乙烯乳胶等。 用于：钩端螺旋体病、血吸虫病、类风湿关节炎的辅助诊断。 抗球蛋白实验 3.补体参与抗原抗体反应 4. 免疫标记技术 免疫荧光技术①免疫荧光显微技术a.直接荧光法b.间接荧光法②流式细胞术 酶免疫测定①联免疫吸附试验②酶免疫组织化学技术 放射免疫分析法①液相法②固相法 免疫胶体金技术 化学发光免疫技术 免疫印迹法该法 （1）免疫荧光技术 常用荧光素：异硫氰酸荧光素（FITC）和藻红蛋白（PE）等 直接法 Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag Ag 间接法 冲洗 冲洗1 冲洗2 可通过荧光显微镜或流式细胞仪观察荧光。 （2）酶免疫测定 将抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的高效性相结合,通过酶作用于底物后的显色反应判定结果. 常用标记酶:辣根过氧化物酶(HRP) 邻苯二胺 HRP 催化 显黄色 E E Ag OPD Ab HRP 酶联免疫吸附试验(ELISA) 双抗体夹心法 间接法 将抗原抗体反应在固相上进行,通过洗涤除去游离成分.目前是应用最广的免疫酶技术。 E E 待测为抗原 待测为抗体 冲洗 （3）放射免疫技术(RIA) 定义：用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫检测的方法。 常用标记物：125I和131I