2015-2016学年 5.1《DNA的粗提取和鉴定》课件.pptx

;1.理解DNA粗提取与鉴定的原理； 2.通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗 提取,了解DNA的物理化学性质； 3.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。; 以DNA的立体结构为背景，回顾DNA的相关内容，设计问题，导入新课。首先了解实验原理，思考实验内容，学习提取DNA的方法与DNA的鉴定技术，然后以鸡血细胞为例详细地介绍了该实验的方法和步骤。并提醒注意实验的关键性操作及常考知识点，最后通过课堂检测巩固本节课内容。 掌握DNA的粗提取与鉴定的方法是本节课的重点和难点，在教学中先演示实验过程，讲解选用鸡血细胞做材料的原因，两次加蒸馏水的目的是什么，鉴定DNA的方法等。然后结合课本熟悉DNA的粗提取与鉴定，强调实验过程中的重要知识点，这样有助于学生更好的学习DNA的粗提取与鉴定。 ? ;DNA的立体结构;实验原理： 提取原理：DNA主要存在于动植物(鸟类血液的红细胞、新鲜菜花、蒜黄和菠菜等)细胞的细胞核内，且往往与蛋白质结合形成染色质。首先，利用DNA在NaC1溶液中的溶解度具有二重性和蛋白质的盐溶现象，当NaCl的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低,析出DNA，并分离出蛋白质；其次，利用DNA不溶于酒精，但细胞中其他物质(某些盐类、蛋白质、糖类或其他大分子物质)可溶于酒精的特点进一步提取较纯净的DNA；最后，利用DNA遇二苯胺试剂呈蓝色的特异性显色反应鉴定提取DNA。 ???? 鉴定原理：DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成戊糖，它再和二苯胺起反应而显现蓝色。;1.能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？;;（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA在80 ℃以上才会变性。 ③洗涤剂能够瓦解细胞膜， 但对DNA没有影响。; 在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 DNA+冰醋酸、少量浓硫酸+二苯胺 蓝色物;1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 2、原则??凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大;（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液;（三）去除滤液中的杂质;（四） DNA的析出与鉴定;2、DNA的鉴定： 取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。;三、操作提示;;鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图;⑤过滤→取纱布上的滤物;⑦加冷酒精使DNA析出（纯化）;;①制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。②整个实验中加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。酒精最好用95%的冷酒精;③加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要轻缓且朝一个方向。保证DNA分子的完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。④鉴定DNA时需沸水浴加热。⑤二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注???不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位。 ⑥盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器（鸡血细胞破碎后释放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNA的损失）。;DNA的粗提取与鉴定;1.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是( ) A.氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B.人血也可代替鸡血进行实验 C.柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D.DNA不能溶于酒精尤其是冷酒精;2.下列操作中，对DNA的提取量影响较小的是( ) A.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质 B.搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 C.在析出DNA黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中 黏稠物不再增多 D.在用酒精沉淀DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合 液放入冰箱中冷却;3.下列图示中能反映DNA溶解度与NaCl溶液浓度(mol/L)之间的关系的是（ ）;4.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低