菠菜基因组DNA提取方法与条件的研究详解.ppt

菠菜基因组DNA提取方法与条件的研究 丛 娟, 李晓玲, 宫 莉, 李连贵 长春工业大学学报(自然科学版) 前 言 实 验 部 分 结果与讨论 结 论 本研究以菠菜叶片为材料,分别采用 CTAB (十六烷基三甲 基溴化铵)法、SDS法、高盐低pH法提取其基因组DNA, 研究了不同提取方法和条件对DNA提取效率和纯度的影响,并对CTAB法提取条件进行了 正交实验优化,得出了菠菜中基因组DNA提取的适宜条件。 分子生物学实验和研究多是以提取研究对象的基因组DNA为起点。但由于植物材料有坚固的细胞壁,核酸含量又较少，而多糖物质和色素含量却较高,且核酸酶活性较高, 这就给植物DNA的提取带来了困难。 A C 1 一、前言 1、实验材料：新鲜洁净的菠菜幼叶 A C 二、实验部分 2、DNA提取 液氮研磨 菠菜叶片 氯仿-异戊醇 离心 提取缓冲液 水浴 取上清 异丙醇 沉淀DNA TE缓冲液溶解 3、确定纯度 4、琼脂糖凝胶电泳  相关计算公式 L-比色杯厚度，一般为1cm OD260-260nm波长处的吸光值 0.020- 1mL溶液内含1μgDNA钠盐时的光吸收值 A260/A280≥1.8,说明提取的DNA中蛋白质基本除尽 A260/A230≥2.0，说明提取的DNA中RNA基本除尽 A C 1 三、结果与讨论 提取液用量对DNA得率和纯度的影响 水浴时间对DNA得率和纯度的影响 氯仿-异戊醇用量对DNA得率和纯度的影响 异丙醇用量对DNA得率和纯度的影响 正交实验 就CTAB法中提取液用量、水浴时间、氯仿-异戊醇用量、异丙醇用量等条件对DNA提取效率和纯度的影响进行了L9(34)正交试验  采用直观分析法对正交实验结果进行计算分析, 得出各指标的优选方案。 A260/A230:A3B3C3D1 A260/A280:A3B1C3D3 得 率:A2B2C2D1 再采用综合平衡法分析,得出CTAB法优选方案为:A2B3C1D3 , 即提取液用量为2.2 mL/g材料、水浴时间为 90 min、氯仿-异戊醇用量为2.4 mL/g材料、异丙醇用量为2.1mL/g材料。 结果  用优化后的CTAB法从菠菜叶片中提取并纯化DNA,进行琼脂糖凝胶电泳 1-3泳道为10ng/L的标准Marker(未酶切DNA,其大小为50kb)上样量分别为1μL，2μL，4μL,4-6泳道为提取出的菠菜基因组DNA经TE溶解并稀释500倍,上样量分别为1μL,2μL,4μL(经估算,DNA含量分别约为 6-7ng,12-13ng,23-25ng) 电泳结果进一步证明,采用CTAB法从菠菜叶片中提取DNA,上述优化出的操作条件是适宜的。