电阻抗法白细胞检验.要点解析.ppt

电阻抗法白细胞检测原理 美国库尔特原理（coulter principle) 细胞计数电阻抗原理 把用等渗电解质溶液（稀释液）稀释的细胞悬液倒入到一个不导电的容器中，将小孔管，也称传感器插到细胞悬液中，小孔是电阻抗法细胞计数的一个重要部分，其内充满了稀释液，并有一个电极，其外侧细胞悬液中有一个外电极。当电流接通后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流，细胞悬液通过有固定直径和厚度的小孔向小孔内部流动，计数孔直径一般＜100um，厚度为75um左右。因为小孔周围充满了具有传导性的液体，其电子脉冲是稳定的。如果供给的电流I和阻抗Z是稳定的，那么根据欧姆定律，通过小孔的电压E也是不变的。当悬液中一个细胞通过小孔时，由于细胞有极小的传导性，细胞的导电性质比等渗的稀释液要低，在电路中小孔感应区内电阻增加，于瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号，这被称为通过脉冲，电压增加程度取决于细胞体积，细胞体积越大，引起的电压变化越大，产生的脉冲振幅越高。通过对脉冲大小的测量可以测定出细胞体积，记录脉冲的数目可以得到细胞计数结果；经过对各种细胞所产生脉冲大小的电子选择，可以区分不同种类的细胞，并进行分析。 电阻抗法白细胞分群及计算方法 根据脉冲的大小，即可人为地将血内的白细胞分成几群（二分群或三分群） 电阻法白细胞“分类”实际上是根据溶血剂作用后的白细胞体积大小的分群，其测量的标准只是根据白细胞体积的大小，而体积大小并不是细胞形态惟一的指标。 直方图与脉冲信号的关系 白细胞体积分布直方图 经过溶血剂处理后的白细胞根据体积大小可以初步确认其相应的种类：第一亚群（小细胞群）是淋巴细胞（LYM);第二个亚群是单个核细胞区（MONO),也被称为中间细胞（MID)；相当于粒细胞的细胞群（GRAN)位于第三亚群（大细胞群）。例如位于35～90fl的颗粒被计数为淋巴细胞，90～160fl的颗粒计数为单核细胞，160fl以上的颗粒计数为粒细胞。 在白细胞计数池中除加入一定量的稀释液外还加入了溶血剂，此溶血剂一方面使红细胞迅速溶解；另一方面使白细胞浆经细胞膜渗出，胞膜紧裹在细胞核或存在的颗粒物质周围。经此处理后的白细胞体积与其自然体积无关，含有颗粒的粒细胞经溶血剂处理后比无颗粒的单核细胞和淋巴细胞体积要大些，但其真实体积与单核细胞相等或更小。白血病细胞、异性淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、浆细胞、嗜碱性粒细胞等多出现在单个核细胞区域，少数也可见于淋巴细胞或粒细胞区。所以白细胞直方图并不能代表自然状况，但可以用于判断白细胞各体积群分布情况。 正常白细胞直方图 异常白细胞直方图 异常白细胞直方图 异常白细胞直方图 异常白细胞直方图 异常白细胞直方图 异常白细胞直方图 白细胞直方图变化的意义 主要是指导实验室工作人员如何做好仪器计数的质量控制及判断是否“涂片复检”。 1.判断白细胞计数时是否受到其他因素的干扰 ⑴某些贫血的病理性红细胞、新生儿红细胞等，对溶血剂有较强的抵抗力，使之不溶解或不完全溶解而影响白细胞计数； ⑵血液内有较多的有核红细胞，溶解后红细胞的核当做白细胞计数； ⑶血小板聚集成团，误计数为白细胞等，影响了白细胞计数，此时白细胞直方图也可发生相应的改变，因而观察图形变化可判断仪器的工作状态。 白细胞直方图变化的意义 2.判断直方图是否符合筛选标准，决定涂片镜检 电阻抗法仪器白细胞“分类”（仅是体积的分群）结果，只是用于健康体检或无明显血液学检查异常结果及白细胞各群分布直方图正常的病人。换言之，在白细胞数明显增高或减低，或末梢血出现形态不典型或幼稚细胞时，均可导致直方图异常，此时细胞“分类”结果是不准确的。因此，中华检验医学会专家座谈会明确规定，使用血细胞分析仪进行白细胞“分类”时，必须具备：①病人白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量均在正常范围内②白细胞体积分布直方图完全正常的情况下，才能作为白细胞分类结果用于临床，否则必须涂片镜检。 掌握本实验室血细胞分析仪的白细胞正常直方图 不同厂家、不同型号的仪器白细胞体积分布直方图是不完全相同的，但电阻法各类仪器白细胞直方图的病理变化趋势是一致的。因此，在分析各种病理变化的图形之前，必须先掌握自己实验室所拥有的血细胞分析仪的白细胞正常直方图。 电阻抗法红细胞及血小板检测原理 红细胞计数和红细胞比容测定原理 红细胞通过小孔时，形成相应大小的脉冲，脉冲的多少即红细胞的数目，脉冲的高度代表单个脉冲细胞的体积。脉冲高度叠加，经换算即可得红细胞数，得出红细胞比容。 血红蛋白测定原理 血红蛋白测定原理 被稀释的血液加入溶血剂后，红细胞溶解，释放血红蛋白，后者与溶血剂中有关成分结合形成血红蛋白衍生物，进入血红蛋白测试系统，在特定波长（一般530nm～550nm)下比色，吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成正比，仪器便可显示其浓度。国际血液标准委员