实验基础与急性毒性教案.ppt

实验动物的染毒和处置 实验动物染毒 毒理学试验中染毒途径的选择，应尽可能模拟人在接触该受试物的方式。 最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及注射途径。 不同途径的吸收速率，一般是：静脉注射＞吸入＞肌肉注射＞腹腔注射＞皮下注射＞经口＞皮内注射＞其他途径(如经皮等)。 食品毒理学试验的设计原则 试验设计(experimental design)是指为试验研究制定出一个通盘的、周密的、安排合理的、科学性强的设计方案，将试验对象随机分配到两个或多个组中，对试验对象施加某种干预或处理因素，观察比较不同处理的效应。 食品毒理学试验包括体内试验和体外试验两种。 体内试验是以实验动物为模型，通过外源化学物对实验动物的毒性反应，向人（原型）外推，以期评估外源化学物对人的危害及危险性。 体外试验则主要用于筛选和预测急性毒性和机制研究。 毒理学实验能否获得预期结果，试验前的试验设计至关重要。 科研设计遵循的三原则：随机、重复、对照。 体外试验设计 1 溶剂/赋形剂 所用溶剂/赋形剂不应与受试物发生化学反应。推荐使用溶剂/赋形剂。 2 受试物 了解受试物各方面性质，测定受试物在试验介质中的溶解性。溶解性限度就是出现沉淀的最低浓度。 3 受试对象 4 剂量设置 5 代谢活化 代谢活化系统的选择和条件依赖于受试物的类别。 6 对照 未处理（空白）对照、阳性对照、阴性对照 7 重复 由质控良好的实验得到明确的阴性结果和阳性结果，不强调要求重复。可疑结果则应重复实验。 体内毒理学试验设计 1 实验动物 动物选择，首选实验动物是其对受试物的代谢过程、生理反应和生化特性基本上与人接近的。 动物数量，各组各组动物数的设计应考虑到统计学的要求。 2 受试物 资料、处置、给予方式 体内毒理学试验设计 3 对照 对照条件 对照类型 未处理（空白）对照（必要时设）：对照组不施加任何处理因素，不给受试物也不给以相应的操作。 阳性对照（必须设）：用已知的阳性物(如致突变物)检测试验体系的有效性。如在遗传毒理学试验、致畸试验和致癌试验中用已知的致突变物、致畸物或致癌物染毒，应该得到肯定的阳性结果(即致突变性、致畸性或致癌性)。 阴性对照（尽可能设）：不给处理因素但给以必须的实验因素(溶剂／赋形剂)，以排除此实验因素(溶剂／赋形剂)的影响。没有阴性对照组就不能说明受试物染毒与有害作用之间的关系。 历史性对照：由本实验室过去多次实验的对照组数据组成。 体内毒理学试验设计 4 剂量分组 一般至少要设3个剂量组(即高剂量组、中剂量组、低剂量组)。 一般要求，高剂量组应出现明确的有害作用，或者高剂量组剂量已达到染毒的极限剂量(如大鼠或小鼠灌胃或注射的最大容量)。 低剂量组应不出现任何可观察到的有害作用(即相当于NOAEL)，但低剂量组剂量应当高于人可能的接触剂量，至少等于人可能的接触剂量。 中剂量组的剂量介于高剂量组和低剂量组之间，应出现轻微的毒性效应(即相当于LOAEL)。 5 观察指标 指标的有效性、客观性、准确度和精密度、灵敏度、特异性、选择指标的数目、指标的标准化 体内毒理学试验设计 6 试验期限 某些试验(如致畸试验和多代生殖试验)的试验期限是由受试实验动物物种或品系而决定的。而其他毒性试验的期限在某种程度上由定义所决定。 7 试验设计常用方法 完全随机设计 配对设计 随机区组设计 析因设计 拉丁方设计 毒理学实验结果处理和分析 在评价毒理学试验的结果时，应综合考虑生物学意义和统计学意义。统计检验的假设是关于总体特征的假设，检验方法是以统计量的抽样分布为根据的，得到的结论是概率性的，不是绝对的肯定或否定，不等同于有或无生物学意义。对实验结果作出科学的判断和解释，应该根据统计学分析的结果、生物学知识和经验。 毒理学试验的数据处理和统计方法 毒理学研究的数据类型 计量资料 通过对观察单位用定量的办法测量某项指标数量大小所得到的资料。如动物身长、体重、血红蛋白量、进食量等。 分类资料 将观察单位按某物种性别或类别分组，然后清点各组的观察单位数目所得到的资料，如实验动物的性别分雌雄，实验结果分阳性、阴性等。 毒理学试验的数据处理和统计方法 毒理学研究的数据类型 等级资料 将观察单位按某种属性的不同程度分组，统计各组的观察单位数目所得到的资料。如效果判定为显效、有效、无效；程度分轻、中、重；实验室检测结果分－、±、＋、＋＋、 ＋＋ ＋、＋ ＋＋ ＋等。 数据类型转换 如将血红蛋白按正常与异常分组，资料便转换为计数资料。 数据转换 稳定方差、直线化、使分布正态化或接近正态。 毒理学试验的数据处理和统计方法 假设检验的一般考虑 实验和观察的单位 处理组间进行比较的形式 假设检验和概率值 数据处理和统计方法 (1) 处理组与阴性对照组比较 (2) 剂量-效应关系和剂量-反应