形态学实验技术精要.ppt

* * * * * * * CD30何杰金氏淋巴瘤 R-S细胞标记物。 * CD44v6为细胞粘附分子类抗体，是一种转移相关因子。 * * PR (孕激素受体) 经典的克隆号1A6 * * MAP-2ab（Microtubule-associated protein微管相关蛋白） 中文检索文献共4篇 为正常神经元细胞和树突细胞的标记物，可与GFAP联合应 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * ER（雌激素受体） 不同ER的区别点 ER克隆号：1D5, 6F11,与组合型1D5+6F11， 1D5, 6F11的为分子量均为67kDa。ER基因为140 kb DNA基因片段，由8个外显子组成，在调控蛋白转录中有6个不连续的功能区，1D5作用位点在N-端的(A/B)区，6F11的功能区为A到F的不连续的功能区。1D5为全球通用 金标准，组合型1D5+6F11增加ER的结合位点。 * * * * * * * Rb2/P130 有两种方法：一是对检测结果阳性细胞指数来定性。判断方法是以一个视野中的阳性细胞数与总细胞的百分比，再取10个相同视野算去平均数。另一种方法是以染色阳性强度和阳性检出率相结合而定，一般阳性细胞数在0—25%为阴性，25—50%为阳性+，50—75%为阳性++，75%以上为阳性+++。第二种方法易出现人为误差。用图像分析系统进行结果检测的定量分析更为准确。 结果统计： 实验设计 根据课题要求，通过查阅文献选出具有代表意义的较新的抗体，通过合适的联系方式确定抗体的出处，购买方式及到货日期。在每次染色或每一批染色前，都应列出实验计划，做好免疫组化标记记录单，拿到的任何一种抗体都应首先进行预实验，以确定正式实验中抗原的修复方式、抗体的最佳稀释度及孵育时间等，然后才能进行大批的实验。 * * * * * * * * * * * * * * * uoshuiji * * * * * * * * * * * Envision 法操作流程 1. 石蜡切片脱蜡至PBS。 2.0.3％H2O2甲醇液或3％H2O2室温孵育20min。 3.抗原修复。 4.滴加适当稀释的一抗370C 60min或40C过夜。 5.PBS洗涤。 6.EnVision 370C 孵育30min或室温60min。 7.PBS洗涤。 8.DAB(0.04%)显色（镜检控制），水洗、复染、封片。 何杰金氏淋巴瘤 R-S细胞CD30 甲状腺癌 CD44v6 甲状腺乳头状癌E-cadherin 乳腺浸润性导管癌PR 乙型肝炎HBsAg 脑胶质瘤MAP 2ab 免疫组化染色应注意 免疫组化染色方法已不是什么很难的问题，操作步骤简单也易掌握,但要染好免疫组化,其中方法的技巧将是每位操作者在实际工作不断摸索和探讨的事,但最基本的应从以下方面加以注意。 提高免疫组化敏感性的方法 概述：提高免疫组化敏感性有两种途径，一是增加IHC方法的敏感性，如二步法较三步法的敏感性较为显著提高；另一途径是通过对石蜡切片酶消化和热处理是IHC检测敏感性大为提高。抗原热修复是甲醛固定组织后会使蛋白质的三级结构发生改变，尤其是蛋白质分子苯环结构上的结构位置发生改变，从而使要检测的抗原决定簇位点改变方向，通过高温使抗原决定簇的位点恢复。另外，2/3的商品化的抗体需酶消化以暴露抗原决定簇。 　抗原修复(antigen retrieval，AR) 其作用是暴露抗原，增加细胞和组织的通透性，以便抗原抗体最大限度的结合，增加特异性染色，避免非特异性染色。目前常用的修复方法有以下几种。 　 蛋白酶消化 可以去除覆盖抗原决定簇表面的杂蛋白，更为重要的是因甲醛固定而引起的交联被打开而起暴露抗原决定簇的作用。目前常用的酶有：胰蛋白酶（主要用于细胞内抗原的修复）；胃蛋白酶（主要用于细胞间质或基底膜抗原的修复）。 热诱导的抗原修复 对大多数抗原有效，尤其是对核抗原的修复作用更为明显，最常用的抗原修复液是pH6.0的枸橼酸缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液，它们的作用原理是通过钠离子的螯合而实现的。热诱导的抗原修复包括水浴加热法、微波加热法、高压加热法。 0.01% mol/L枸橼酸缓冲液，pH6.0（800-1500 ml）于压力锅中，大火加至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于不锈钢或耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷汽，即达到工作温度和工作压力（扣阀至喷汽以6 min为最佳），