中药粉膜II号对HPV表达的影响 毕业论文.doc

中药粉膜II号对HPV表达的影响 【摘要】： 目的观察中药粉膜II号对HPV表达的影响。 方法用生理盐水将中药粉膜II号稀释为100%、80%、60%、40%4个浓度，分别与HPV混悬液混合，按试剂盒步骤提取DNA，制成HPV-DNA模板，绘制量标准曲线。 结果随着作用时间的延长，中药粉膜II号对HPV表达的影响越明显。 结论中药粉膜II号对HPV—DNA的扩增有抑制作用。 关键字：尖锐湿疣 中药粉膜II号 HPV 【Abstract】 【Objective】Observation of powder membrane II expression of HPV. 【Methods】Use saline powder membrane II will be diluted to 100%, 80%, 60%, 40% respectively, and the concentration of four HPV suspension liquid mixing, press kits, extracted DNA templates, drawing HPV - quantity standard curve. 【Results】With the extension of time, the effect of powder membrane II the obvious effects of HPV expression. 【Conclusion】Powder membrane II of HPV - DNA amplification. 【Key Word】condyloma acuminatum Powder membrane II HPV 尖锐湿疣（condyloma acuminatum，CA）是发病率仅次于淋病和非淋菌性尿道炎的性传播疾病，它由人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）感染所致，目前世界上还没有较理想的杀灭该病毒药物。临床上所能采用的治疗方法，无论化学的、物理的、或药物的，均以局部破坏瘤体为目的，不能杀灭病毒，除了形成局部的创面、痛苦、易感染外，且复发率极高，约为20%—40%。 中药粉膜II号选用黄柏、五倍子清热燥湿、解毒疗疮；辅以生黄芪益气固表、托毒排脓、敛疮生肌；乳香、没药活血祛瘀、消肿生肌止痛；枯矾、冰片杀虫止痒；五倍子、儿茶收湿敛疮生肌。诸药合用，共奏清热利湿、活血祛瘀、益气生肌、祛腐生新之疗效。现在药理学研究表明，中药粉膜II号具有抑菌、抗炎、抗病毒的作用，可抑制炎症组织异常增生。近年来，我们应用以中药粉膜II号为方药治疗尖锐湿疣取得了较好效果。为探讨中药粉膜II号有无抗人乳头瘤病毒的作用，我们采用荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术，观察不同浓度中药粉膜II号对离体尖锐湿疣皮损的HPV—DNA的影响，发现中药粉膜II号具有抗人乳头瘤病毒的作用。 材料 1 药材：中药粉膜II号，药物组成：黄柏、五倍子、莪术等十味药。 2 试剂：HPV核酸扩增（PCR）荧光检测试剂盒（包括DNA提取液1、DNA提取液2、PCR反应液、Taq酶、UNG），深圳匹基生物技术开发公司提供。 3 仪器：BIO-RADiCycler荧光定量PCR仪（美国PE公司）；离心机。 方法 实验材料（实验药品制备）： 中药粉膜II号，由湖北省中医院制剂室提供。用生理盐水将中药粉膜II号稀释为100%、 80%、60%、40%4个浓度，另设生理盐水对照。 标本的采集与处理： 从湖北中医院妇产科门诊采集来自于尖锐湿疣患者外阴部位的疣体标本，集中到一支离心管中，称重30mg，用玻璃匀浆器匀浆，再加入5ml生理盐水，配成6mg/ml的离体HPV混悬液，备用。 PCR检测方法： 3.1 HPV混悬液的制备：药品处理疣体的方法：用移液枪吸取25μl不同浓度的药品液和25μl HPV混悬液至15ml离心管中，振摇均匀，使药品与疣体能充分作用，置37℃水浴箱培养。在药品处理疣体1d、3d、5d、7d后，各取1组进行以下试验。 3.2 HPV-DNA的提取：从温浴箱中取出经药品处理的HPV混悬液，按试剂和步骤提取DNA：加入50μl生理盐水，混匀后再加入100μl DNA提取液1，振摇均匀，1200r/min离心10min，弃去上清液，再加入25μl DNA提取液2，充分混匀，100℃沸水煮10min，1200 r/ min离心10min，上清液即为HPV-DNA模板。 3.3 DNA扩增：取检测试剂盒中PCR反应液37.6μl，TaqDNA聚合酶0.4μl，UNG0.0