第八芳香族硝基和氨基化合物精要.ppt

第八章 芳香族硝基和氨基化合物 及其代谢产物的测定 主要内容 第一节 苯胺和联苯胺 苯胺理化性质 易挥发；微溶于水； 苯胺检测的原因 苯胺的广泛应用； 可经呼吸道、皮肤和消化道进入人体 毒害：急性、慢性、皮肤损伤； 尿中代谢物：对氨基酚 苯胺检测的样品采集 在体内代谢速度快：班末或班后2小时内采样 样品保存； 尿中对氨基苯酚的测定 （一）盐酸萘乙二胺分光光度法 1 原理 尿液加盐酸水解后，于中性溶液中，用乙酸乙酯萃取对氨基酚，再酸化反萃取至盐酸溶液中，经重氮化，与盐酸萘乙二胺耦合显色，于波长582nm处比色定量 （二）高效液相色谱法 1 原理 尿液加盐酸加热水解后，在酸性条件下用乙酸乙酯萃取，除去部分干扰物，然后再中性条件下用乙酸乙酯提取尿样中的对氨基酚，C18柱分离，254nm检测，流动相为30%甲醇水，以保留时间定性，用峰高或峰面积定量。 本法最低检测浓度：0.5mg/L 超高效液相色谱-质谱法测定尿中苯胺和联苯胺 超高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法基本相同，所改变的地方有以下几点： （1）小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 （2）超高压输液泵的使用。 （3）灵敏检测器。 （4）使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术； （5）仪器整体系统优化设计。 第二节 硝基苯（C6H5NO2） 广泛用于染料、农药、炸药等工业领域，进入环境后难以被生物降解 是致癌物 无色或淡黄色 苦杏仁味 油状液体 见光颜色变深 易溶于有机溶剂 体内代谢产物为对硝基酚：强还原性 酸碱指示剂 代谢和生物监测指标 脂溶性化合物， 可经呼吸道、皮肤和消化道吸收 反复接触引起肝肾损伤及贫血，饮酒增强毒性 样品采集及保存 用具塞聚乙烯塑料瓶采集接触者班后尿，尽快测量比重 邻甲酚分光光度法：100ml尿液加入3滴甲醛，4℃可保存3天 高效液相色谱法：100ml加入3~4滴盐酸， 4℃可保存2周 尿中对硝基酚的测定 （一）邻甲酚分光光度法 1 原理 尿中对硝基酚以游离形式或与葡萄糖醛酸、硫酸等结合存在。尿样经水解后，结合的对硝基酚转化为游离形式，用有机溶剂萃取对硝基酚，再用氨溶液反萃取。用三氯化钛还原对硝基酚，生产对氨基酚与邻甲酚作用，形成靛酚蓝，于620nm比色定量。 尿中对硝基酚的测定 （二）高效液相色谱法 1 原理 尿样经水解后，加NaCl旋涡混合溶解，用乙酸乙酯萃取对硝基酚，梯度洗脱，C18柱分离，在318nm波长下测定。以保留时间定性，峰高或峰面积定量。 第三节 三硝基甲苯（TNT） 三种同分异构体 淡黄色针状结晶 无臭 有吸湿性 难溶于水 易溶于有机溶剂 属爆炸品 体内代谢产物： 代谢和生物监测指标 TNT在人体内代谢途径：皮肤吸收 TNT与蛋白质加合形成4A-Hb（接触TNT人群的生物标志物） 样品的采集及保存 血样 采集静脉血1ml，注入经肝素处理的试管中，混匀，采学过程避免污染，冰箱冷藏保存 尿样 用聚乙烯塑料瓶收集100ml班后尿 采样避免污染，采样后尽早加酸，-20℃保存 尿液中TNT代谢产物的测定 主要方法有分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法。 分光光度法只能测定硝基化合物的总量 气相色谱不能测定遇热分解的4-羟氨基-2,6-二硝基甲苯（4-HA） HPLC可对异构体进行分离测定 HPLC测定TNT及五种代谢产物 原理 尿样加6mol/L 盐酸于40℃水解10min，碳酸氢钠调pH=7后用苯等体积提取4-HA，或在100℃水解1h，碳酸氢钠调pH=7后用苯等体积提取尿中TNT其他代谢产物。 气相色谱测定尿中2,6-二硝基-4-氨基甲苯（4-A） 尿液加盐酸加热水解后，在PH为7-8条件下用甲苯萃取尿样中4-A，采用0V-17柱分离，电子捕获检测器检测，以保留时间定性，峰面积定量 净化——液-液萃取法 固相萃取Solid Phase Extraction , SPE 固相萃取：是近年发展起来一种样品预处理技术, 由液固萃取和柱液相色谱技术结合发展而来 , 主要用于样品的分离、纯化和浓缩。 广泛的应用在医药、食品、环保、商检、农药残留等领域。 固相萃取原理 基于液相色谱分离机制的样品前处理方法。利用固体吸附剂将样液中目标化合物吸附，与样品中的基体和干扰化合物分离，后用洗脱液洗脱，达到分离与净化目标化合物的目的。 固相萃取原理 分为正相（吸附剂极性大于洗脱液极性），反相（吸附剂极性小于洗脱液极性），离子交换和吸附 。 固相萃取仪 SPE装置由SPE小柱和辅件构成。 SPE小柱：由三部分组成，柱管、烧结垫和填料。 SPE辅件：一般有真空系统、真空泵、吹干装置、惰性气源、大容量采样器和缓冲瓶。 SPE 操作步