第二 核酸化学精要.ppt

第二章 核酸化学 第一节 核酸的概述（染色体和基因） 第一节 核酸的概述（核酸的种类） 第一节 核酸的概述（核酸的分布） 第二节 核苷酸(总） 第二节 核苷酸(1戊糖） 第二节 核苷酸(2碱基1） 第二节 核苷酸（2碱基2[嘧啶1]） 五种碱基都能形成酮式-烯醇式或氨基-亚氨基的互变异构。这两种异构体的平衡关系受介质酸碱环境的影响。 （三）磷 酸 RNA和DNA组成 第二节 核苷酸(3核苷1） 核苷与脱氧核苷（碱基+戊糖） 第二节 核苷酸(4核苷酸1） 核苷酸和脱氧核苷酸（核苷 + 磷酸） 第二节 核苷酸(4核苷酸3） 核苷酸或脱氧核苷酸 第二节 核苷酸(4核苷酸4） 第二节 核苷酸(5多磷核苷酸2） 第二节 核苷酸(5多磷核苷酸1） 第三节 核酸的结构 一、DNA的结构1(总） （一）DNA的一级结构1 由相间排列的戊糖和磷酸构成核酸大分子的主链； 代表其特性的侧链则可看成其主链上的侧链基团。 DNA和RNA的链都有特殊的方向性，每条线性的核酸链都有一个5′末端和一个3′末端。 DNA和RNA的主链都是亲水的，糖残基的羟基基团可以和水形成氢键。 主链中的磷酸基团pK值接近于0，因此在pH7的中性环境中它是完全解离的并带负电荷。这些负电荷总是被带正电荷的蛋白质、金属离子和多胺所中和。 连接键 （一） DNA的一级结构3(线条缩写) （一）DNA的一级结构4(字母简写) （二）DNA的二级结构1(总) （二）DNA的二级结构2 （二）DNA的二级结构3 1．DNA双螺旋结构模型要点1（1） 1．DNA双螺旋结构模型要点1（2） 1．DNA双螺旋结构模型要点2（1） 1．DNA双螺旋结构模型要点3 1．DNA双螺旋结构模型要点3 1．DNA双螺旋结构模型要点4 2．双螺旋结构的稳定因素1 2．双螺旋结构的稳定因素2 3．DNA双螺旋的不同类型1 3．DNA双螺旋的不同类型2 （四）DNA的三结构 二、 RNA的分子结构1 （一）RNA一级结构 （二）RNA的碱基组成 （三）RNA的类型（ rRNA 1） （三）RNA的类型（ rRNA 2） （三）RNA的类型（mRNA1） （三）RNA的类型（tRNA） （四）RNA的二级结构1(总) （四）RNA的二级结构2(1) （四）RNA的二级结构2(2) （四）RNA的二级结构2(3) （四）RNA的二级结构2(4) （四）RNA的二级结构2(5) 第四节 核酸的理化性质 一、核酸的一般理化性质 二、核酸的变性与复性 二 核酸的变性、复性与杂交 （一）变性 （一）变性 DNA的溶解温度（Tm） 增色效应： DNA由双链变成单链的变性过程会导致溶液紫外光吸收的增加。 溶解温度（Tm） DNA热变形时，其紫外吸收增加值到达总增加值一半时的温度 称为DNA的变性温度或溶解温度。 Tm值的大小与下列因素有关： （1）G-C含量的影响： G-C含量越高，Tm值越大，Tm与G-C含量成正比关系。因为G-C比A-T更稳定（氢键）。Tm与所含G-C的多少的关系，可用经验公式计算不同DNA的Tm： （G＋C）％＝(Tm－69.3)×2.44 （2）溶液离子强度的影响 （3） 溶液的pH值 高的pH下， 碱基去质子而失去形成氢键 的能力， pH 11.3时，DNA完全变性； pH 5时，DNA易脱嘌呤。 对单链DNA进行电泳时，需常在凝胶中加入NaOH以维持其变性状态。 （4）变性剂 尿素、甲酰胺、尿素、甲醛等可破坏氢键，妨碍碱基堆积，使 Tm下降。对单链DNA进行电泳时，常使用上述变性剂。 （二）复性 （三）核酸的杂交 （3）核酸的杂交技术1 （3）核酸的杂交技术2 （3）核酸的杂交技术3（3） 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50 ?g/ml双链DNA 40 ?g/ml单链DNA（或RNA） 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的应用 OD-- optical density（光密度）的缩写， 表示被检测物吸收掉的光密度 （一）变性 （二）复性 （三）杂交 定义：指核酸双螺旋区碱基对之间氢键断裂和堆积碱基之间疏水作用的破坏，双链DNA解螺旋形成单链，它并不涉及共价键（磷酸二酯键）的断裂。 变性因素：热变性、酸碱变性等。 变性的相对量 温度0C 60 80 100 1.0 1.2 1.4 1.6 0 Tm Tm Tm 100% Poly d(A-T) Poly d(G-C) DNA （1） G-C含量 （2）溶液的离子强度 （3）溶液的