第二纯培养精要.ppt

武汉大学中国典型培养物保藏中心 几种常用菌种保藏方法的比较 方法名称 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价 冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体） 石蜡油封藏法* 沙土保藏法 冷冻干燥法 低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养 干燥、无氧、低温、有保护剂 各大类 细菌、酵母菌 各大类** 产孢子微生物 各大类 3-6月 6-12月 1-2年 1-10年 5-15年 简便 简便 简便 简便有效 简便有效 矿油斜面覆盖保藏 武汉大学中国典型培养物保藏中心 掌握定义：无菌技术、菌落、纯培养、二元培养物； 掌握固体培养基分离纯培养的方法； 了解液体培养基分离纯培养的方法； 掌握获得目的微生物分离纯化的基本流程； 掌握菌种保藏的意义、常用菌株保藏方法； 了解国内外菌种保藏机构。 本章要求 第二章 纯培养 1．一般说来，严格的无菌操作是一切微生物学工作的基本要求，但在分离与培养极端嗜盐菌时，常在没有点酒精灯的普通实验台上倾倒培养平板、在日常环境中直接打开皿盖观察和挑取菌落，而其研究结果并没有因此受到影响，你知道这是为什么吗？ 答：培养极端嗜盐菌的培养平板需要添加很高浓度的氯化钠（25%），实验室环境中的一般微生物都不能在这种选择培养基上生长，因此在实验过程中，即使不采取无菌操作技术，实验结果仍不会受到影响。 2．如果希望从环境中分离得到厌氧固氮菌，你该如何设计实验？ 答：（1）根据选择分离的原理设计不含氮的培养基，在这种培养基上生长的细菌，其氮素应来自固氮作用。（2）将环境样品（例如土样）稀释涂布到选择平板上，放置于厌氧罐中。对厌氧罐采用物理、化学方法除去氧气，保留氮气。培养后在平板上生长出来的细菌应是厌氧固氮菌或兼性厌氧固氮菌。（3）挑取一定数量的菌落，对应点种到两块缺氮的选择平板上，分别放置于厌氧罐内、外保温培养。在厌氧罐内外均能生长的为兼性厌氧固氮菌，而在厌氧罐外的平板上不能生长，在厌氧罐内的平板上生长的即为可能的厌氧固氮菌。 3、对细菌的细胞形态进行观察和描述时应注意哪些方面?你是否能很快地在显微镜下区分同为单细胞的细菌、酵母菌和原生动物? 答：(1)首先应使用稀释涂布等方法对待检菌株的纯度、群落形态、生理特性等进行检查、确认。(2)选用正常的新鲜培养基和新鲜培养物进行培养和观察，避免培养过程中一些物理、化学条件的改变或培养时间过长等因素对细胞形态的影响。(3)报告细胞大小时应选用多个细胞检测的平均数，并记录所用的实验方法，包括培养条件、培养时间、样品制备方法和染色方法等。(4)可从大小和形态上对细菌、酵母菌和原生动物进行区分。酵母菌、原生动物个体较大，一般可用低倍镜观察，酵母菌细胞一般呈卵圆形、圆形、圆柱形或柠檬形，不具运动性，原生动物细胞形态多变，能够运动。相比较而言，细菌细胞一般较小，需用高倍镜或油镜才能看清。 4、菌种保藏的意义、常用菌株保藏方法 * a）接种环在火焰上灼烧灭菌； b）烧红的接种环在空气中冷却，同时打开装有培养物的试管；c）用接种环沾取一环培养物转移到一装有无菌培养基的试管中，并将原试管重新盖好； d）接种环在火焰上灼烧，杀灭残留的培养物。 * 常用于真菌孢子分离法。 用显微镜挑取器，从分离材料中挑取一个细胞来培养的方法为单细胞挑取法 1、微生物培养的常用器具及其灭菌 灭菌方法：高压蒸汽灭菌 干热灭菌 1、微生物培养的常用器具及其灭菌 利用高温灭菌（sterilization) 高温灭菌法 干热灭菌法 火焰灼烧法 烘箱热空 气灭菌法 湿热灭菌法 巴氏消毒法 煮沸消毒法 间歇灭菌法 高压蒸汽灭菌法 生物安全超净柜 小型无菌箱 平板（plate）又称 培养平板（culture plate） 接种针 解剖镜 ……….. .. … 培养 * a）接种环在火焰上灼烧灭菌； b）烧红的接种环在空气中冷却，同时打开装有培养物的试管；c）用接种环沾取一环培养物转移到一装有无菌培养基的试管中，并将原试管重新盖好； d）接种环在火焰上灼烧，杀灭残留的培养物。 * 常用于真菌孢子分离法。 用显微镜挑取器，从分离材料中挑取一个细胞来培养的方法为单细胞挑取法