第三核酸的结构与功能精要.ppt

1.在DNA复性过程中，将不同种类的DNA单链分子或RNA分子置同一溶液中，就可以形成杂化双链。 2.杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 (三)核酸分子杂交(hybridization) 3.核酸分子杂交的应用 （1）研究DNA分子中某一种基因的位置 （2）确定两种核酸分子间的序列相似性 （3）检测待检样品中是否存在某些专一序列 （4）该方法是基因芯片技术的基础 * (三)核酸分子杂交(hybridization) 4.核酸分子杂交技术 （1）Southern 印迹（DNA印迹与杂交） 一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。 (三)核酸分子杂交(hybridization) 4.核酸分子杂交技术 （2） Northern 印迹（RNA印迹与杂交） RNA片段经电泳后，将RNA固定在硝酸纤维素膜上后,用互补的,具有放射性标记的RNA或DNA探针与其杂交.为了与DNA印迹法(southern印迹法)区别,叫RNA印迹。 * * 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA 依据切割部位不同 核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特异性 限制性核酸内切酶。 核酸外切酶：5′→3′或3′→5′核酸外切酶。 * * * * * * * * * * * * * 氢键维持双链横向稳定性，碱基堆积力维持双链纵向稳定性。 （二） DNA双螺旋结构模型要点 A T C G H N N N N N H O H N N CH3 O N N N N O H H N H N N N O H H （三）.DNA双螺旋结构的多样性 不同类型DNA的结构参数 　 A型－DNA B型－DNA Z型－DNA 螺旋旋向 右手螺旋 右手螺旋 左手螺旋 螺旋直径 2.55nm 2.37nm 1.84nm 每一螺旋的碱基对数目 11 10.4 12 螺距 2.53nm 3.54nm 4.56nm 相邻碱基对之间的垂直间距 0.23nm 0.34nm 0.38nm Watson和Crick当年提出的是理想化的DNA双螺旋模型，后来发现其各项参数均与实际的DNA双螺旋结构有一定差异。 (四) DNA的高级结构 1.原核生物DNA的超螺旋结构 (1) 定义 即在DNA二级结构的基础上进一步折叠成环状或麻花状的超螺旋结构(superhelix 或supercoil)。 环状 麻花状 (3) 意义 DNA超螺旋结构整体或局部的拓扑学变化及其调控对于DNA复制和RNA转录过程具有关键作用。 ①正超螺旋(positive supercoil) 盘绕方向与DNA双螺旋方同相同。 ②负超螺旋(negative supercoil) 盘绕方向与DNA双螺旋方向相反。 (2) 种类 * 2.DNA在真核生物细胞核内的组装 真核生物染色体由DNA和蛋白质构成，其基本单位是 核小体(nucleosome)。 核心颗粒 核小体 连接区 核心颗粒：由长约150bp的双螺旋DNA以超螺旋方式缠绕组蛋白八聚体1.75圈组成。 连接区：由连接区 DNA 和组蛋白H1组成 连接区DNA：连接相邻两个核心颗粒 * 核小体的构成 连接区DNA（约60bp） 组蛋白H1 DNA（约150bp） 组蛋白八聚体 组蛋白种类： H1、H2A、H2B、H3、H4 组蛋白八聚体（核心组蛋白）：由各二分子H2A、H2B、H3、H4 组成八聚体 H1 ：位于连接区 * H1 * Structure and Function of RNA 第三节 RNA的结构与功能 * RNA的种类、分布、功能 * * mRNA结构特点 1. 大多数真核mRNA的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷三磷酸，形成帽子结构：m7GpppN。 2. 大多数真核mRNA的3′末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多