第核酸的结构与功能精要.ppt

三、DNA的变性与复性 (一)变性 (denaturation) 1.定义 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。本质是双链间氢键的断裂。 3.变性后其他理化性质变化 ① OD260增高 ② 浮力密度升高 ③ 粘度下降 ④ 酸碱滴定曲线改变 ⑤ 比旋度下降 ⑥ 生物活性丧失 (1)理化性质变化 2.因素 强酸，强碱，高温，高压，变性试剂如尿素以及某些有机溶剂如乙醇等。 * (2)增色效应： DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA的紫外吸收光谱 200 250 260 300 1.5 1.0 0.5 波长(nm) 吸光度值 变性状态 天然状态 * (3)Tm：紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 解链曲线：在连续加热DNA的过程中以温度为横坐标，以吸光度A260为纵坐标作图，所得的曲线称为解链曲线。 76 80 84 88 92 96 100 ℃ OD260 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 Tm * (二)复性 1.DNA复性(renaturation)的定义 (3)减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。 (1)当变性因素去除后，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 (2)热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 * 1.在DNA复性过程中，将不同种类的DNA单链分子或RNA分子置同一溶液中，就可以形成杂化双链(heteroduplex)。 2.杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 (三)核酸分子杂交(hybridization) 3.核酸分子杂交的应用 （1）研究DNA分子中某一种基因的位置 （2）确定两种核酸分子间的序列相似性 （3）检测待检样品中是否存在某些专一序列 （4）该方法是基因芯片技术的基础 * 五、体内重要的游离核苷酸 * AMP ADP ATP 1、腺苷三磷酸(ATP) 主要功能： 提供能量 AMP ADP ATP 能量储存 能量释放 能量储存 能量释放 * 2、环苷酸 主要功能：参与细胞生理生化过程而控制生物的生长、分化和细胞对激素的效应。 cAMP cGMP * * * * * * * * * 预习： 第四章 维生素 预习思考题 1.列表比较各类维生素的功能与缺乏症 2.列表比较B族维生素的辅酶 * * （二）DNA的一级结构 1.概念：多核苷酸链中是脱氧核糖核苷酸（或碱基）的排列顺序。 * RNA： 5’ pACAGU OH 3’ 2.多核苷酸链的字母式简写式： DNA： 5’ dpACAGT OH 3’ 或5’ ACAGT 3’ d－代表脱氧； p－代表5’ 端； A、G、C、T、U代表相应的核苷酸； OH 代表3’末端； 一般默认5’→3’为正向（从左至右） 5′ 3′ A C A G T OH U * DNA的一级结构中碱基顺序本身就是遗传信息储存的分子形式。生物界物种的多样性即寓于DNA分子中四种核苷酸千变万化的不同排列组合之中。 5′ 3′ T A C G T * 二、DNA的空间结构 （一）DNA的二级结构： DNA的空间结构 二级结构 三级结构 模型：双螺旋结构 提出:1953年 Watson和 Crick * DNA双螺旋结构的要点： ①两条反向平行的多脱氧核苷酸链 两条链的走向分别为5’→3’和3’→5’ * 5’C ②磷酸与脱氧核糖在外 侧，构成ＤＮＡ的骨架。? 碱基在双螺旋内侧。 碱基配对原则： Ａ＝Ｔ、Ｇ≡Ｃ ③两链为互补链。 中间形成氢键 (可变) (不变) 不变 可变 T A C G C G T A A T G C T