第九治疗性抗体精要.ppt

单域抗体仅有一个结构域，制备相当简单，表达出有活性的抗体片段，因此也不失为一种有良好应用前景的基因工程抗体。 与Fab、ScFv相比，单域抗体的相对分子质量更小，更容易穿过靶组织，可以阻断病毒表面的“峡谷”部位，加强对实体瘤的渗透，得到分辨率更高的成像图谱。但由于VH单域抗体不含有VL片段，VH的疏水面暴露较大面积，致使其抗原亲和力大幅度下降，非特异性吸附有所增加，因此将单域抗体作为一种治疗性抗体应用还有许多问题要解决。 （4）超变区多肽（hypervariable region polypeptide） 抗体结合抗原都要通过CDR来实现，因此CDR是抗体结合抗原的最小结构单位。 经晶体结构等分析，发现抗体分子中6个CDR所起的作用是不同的。可以设计出那些在抗原识别及亲和力方面有重要意义的CDR多肽，直接用于诊断或治疗，可望获得理想的结果。 这种只含有一个CDR多肽的抗体，就称之为超变区多肽（hypervariable region peptide）。 超变区多肽的氨基酸序列与CDR区完全一致，大小只有16-30个氨基酸，相对分子质量很小，对组织细胞具有极强的穿透性，能达到其他抗体不能到达的部位。所制备的87、92、6McAb VH功能区的CDR2多肽，其特异性与亲代抗体相似，能与某些细胞表面的呼肠孤病毒III型受体有效结合，使该受体表达下降，并抑制细胞内DNA的合成。 超变区多肽可用同位素、荧光素标记或与毒素、药物等结合，用于疾病的诊断及治疗，已经用于临床检测肿瘤。 应该看到，由于只含有一个CDR区，它的结合抗原能力是不完全及不稳定的，其亲和力及非特异性吸附都可能明显增加，相对分子质量极小，在体内相当不稳定，可能还没有完全发挥其生物学效应时已被清除。 3. 特殊类型的基因工程抗体 根据构建方式的不同主要分为三种： ①双特异性抗体； ②免疫黏连素； ③催化抗体。 （1）双特异性抗体（Bispecific Ab，BsAb） 天然的抗体分子为双价单特异性，如果对天然的抗体分子进行改造，把其他的效应物质如毒素、酶、细胞因子、受体分子通过一定方法与两种杂交抗体Fab片段或V区（VH与VL）连接起来，使之即可与靶细胞结合，又可介导其他一些效应功能，从而最大限度地杀伤靶细胞。这种具有双特异性的抗体分子就称为双特异性抗体或双功能抗体。 BsAb（双特异性抗体）是基因工程抗体研究的重点，已经构建了大量的BsAb，在基础研究、临床诊断、治疗等方面发挥了重要的作用。 抗肿瘤 ①介导活化的T淋巴细胞。 ②介导巨噬细胞的肿瘤免疫疗法。 ③除了介导肿瘤细胞与效应细胞的结合外，BsAb还可用于向肿瘤细胞输送免疫毒素。 ④BsAb还用于介导其他药物的肿瘤杀伤作用。 抗血栓形成 通过化学交联物制备完整抗纤维蛋白单克隆抗体与抗组织纤维蛋白酶原激活物抗体（抗tPA）BsAb。在体内、外均能有效地介导纤维蛋白酶原激活物与纤维血栓的结合，通过特异聚集tPA于血凝块处，在明显减少tPA量的情况下诱发了其强有力的治疗效应，可以对抗血栓形成，同时也避免纤维蛋白原的溶解及出血的副作用。 抗感染作用 BsAb一样适用于介导病原体的代谢。 BsAb构建法： ①化学交联法：SPDP（琥珀酰胺吡啶二硫酚丙酸）随机交联2个Ig分子表面上的巯基构建出双功能Ab。 ②生物学法（杂种—杂交瘤法）： 分泌McAb的杂交瘤C 分泌另一种Ab的脾C 融合 杂种-杂交瘤C 分泌 杂种Ab 2种亲代Ab ③gene工程法：构建出的小分子双特异性Ab（SCFV）2（双功能Ab）将不同Ab的VH和VL区的gene用接头（Linker）连接，生成原Ab的分子内配对（不能形成链内的分子配对）Bs Ab（SCFV）2。 （2）免疫粘连素（Immunoadhesin） 人细胞受体或粘附分子等基因通过一定的方式与抗体的恒定区gene（主要是Fc段）的N端连接起来，在真核细胞中表达出正确折叠的融合抗体样蛋白质分子，这种分子可同时发挥抗体的效应功能及其他效应功能。与双特异性抗体不同的是，免疫粘连素由于不含有抗体的Fab段，但可发挥抗体的特异性效应功能，还含有细胞受体的结合位点，可特异性与受体阳性细胞高亲和结合，发挥新的效应功能。 优点： ①亲和力强； ②半衰期长； ③大大隆低了其工作浓度； ④减少非特异副作用及HAMA发生率，应用上比亲本单克隆抗体更为安全可靠。 2、蛋白酶的水解片段 （1）裂解部位：铰链区H链链间二硫键近C端切 （2）裂解片段： ①F（ab）/2包括一对完整的L链和由链间二硫键相连一对略大于Fab中Fd的H链，称为Fd/ 含235个氨基酸残基；F（ab）