14第7章免疫学检验分析.ppt

酶标记抗体或抗原，和待检的抗原或抗体的免疫学进行特异性反应,形成酶标物的复合物，使底物基质水解而呈色，根据呈色反应对待检的抗原抗体作出定性定量。 　　 很少量的酶即可导致大量的催化过程，所以极为敏感。 Ab-E(Ag-E ) + Ag (Ab) 灵敏度高、特异性强、准确性好 酶标记试剂能够较长时间保持稳定 操作简便、对环境没有污染。 易与其它技术偶联 衍生出适用范围更广的新方法。 5、产物易判定或测定 6、不能对环境和人污染 7、稳定，价廉、易得。 （二）常用的酶 ?1、辣根过氧化物酶（HRP） 活力高、稳定 ? HRP在蔬菜作物辣根中含量很高，由主 酶（酶蛋白）和辅基（亚铁血红素）结合而 成。 HRP的纯度用RZ表示，是403nm的吸光 度与280nm吸光度之比，高纯度的HRP的 RZ≥3.0。 酶活力以单位表示：1min将1μmol的底 物转化为产物的酶量为1个单位。 2、碱性磷酸酶AP 敏感性强 稳定性差 价格高 3、β-Gal 4、 脲酶 5、葡萄糖氧化酶 （三）常用的底物 ?1、HRP的底物 ： 四甲基联苯胺 TMB 蓝色 邻苯二胺OPD 黄色 ABTS 蓝绿色 ? 2、AP的底物 对硝基苯磷酸盐 p-NPP 黄色 3 、β-Gal底物 甲基伞酮基-β-D-半乳糖苷 （4-MUG） 均相酶免疫测定 单克隆抗体 纯化的Ig抗体 Fab 核心 竞争性结合 影响酶的活性 模式1EMIT 基本原理是半抗原与酶结合成酶标半抗原， 保留半抗原和酶的活性。当酶标半抗原与抗 体结合后，所标的酶与抗体密切接触，使酶 的活性中心受影响而活性被抑制。 EMIT原理示意图： EMIT基本原理: 结论 原理： EA 1、 酶 ED 2、形成Ag-ED-Ab时 阻止ED 和EA结合，酶活降低 3、 Ag和Ab的结合能力大于ED 和EA结合 CEDIA示意图 总结 Ag-ED EA Ab Ag Ag多 结论 酶的活性和样本中抗原的量正相关 优势： 可极大提高检测方法的灵敏度 特异性强 稳定性高 适用范围广 实验成本低 BA-HEI原理 要点 1、 Ag-A-Ab不能与B-E 结合， B-E 处于游离状态，保留酶的活性。 2、Ag-A- B-E后酶活性丧失。 BA-HEI原理示意图： 总结 结论 酶的活性和样本中的Ag含量呈？关系 应用 小分子激素 半抗原的测定 评价 小结 酶 底物 标记方法 EIA类型 HEI 模式 不需要分离酶标物的结合物和 游离态的酶标物 共同点 竞争 反应中的抗体限量 酶活性与待测 酶标记物 标记抗原 抗原量 抗体复合物 的作用 EMIT CEDIA BA-HEI 1、酶联免疫分析技术（ELISA） 抗原（抗体）制成固相制剂，在与标本中抗原（抗体）反应后，只需经过固相的洗涤，抗原抗体复合物与其他物质的分离 ，再将酶标抗体（抗原）和复合物中的抗原反应，根据底物和复合物中酶的反应的颜色测定标本中的抗原的量的方法。 优点： 简便、快速、敏感、特异、 实验设备简单、应用范围广、 无同位素污染 （3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标